ICS 67.050 B 50 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T3024-2004 腹泻性贝类毒素的测定 生物法 Determination of diarrhoea shelfish poisonBioassay 2004-01-07发布 2004-03-01实施 中华人民共和国农业部 3发布
SC/T3024-2004 前言 本标准参考了日本厚生省推荐使用的腹泻性贝类毒素的测定方法.
本标准的附录A为资料性附录.
本标准由中华人民共和国农业部提出.
本标准起草单位：国家水产品质量监督检验中心、中国水产科学研究院东海水产研究所.
本标准主要起草人：王联珠、袁骐、李晓川、冷凯良、陈亚瞿、蒋玫.
SC/T 3024-2004 腹泻性贝类毒素的测定生物法 1范围 本标准规定了腹泻性贝类毒素（DSP）的测定方法-生物法.
本标准适用于软体动物贝类可食部分中腹泻性贝类毒素（DSP）的测定.
2原理 用丙酮提取贝类中毒素，再转移至乙醚中，经减压浓缩蒸干后，再以1%吐温-60生理盐水溶解 残留物，注射小鼠，观察存活情况，计算其毒力.
3试剂和材料 3.1丙酮（分析纯）.
3.2乙醚（分析纯）.
3.31%吐温-60生理盐水：称取1.0g吐湿-60，溶于生理盐水（0.8%NaCl）中，并定容至100.0 mLo 4仪器和设备 4.1旋转蒸发器.
4.2均质器.
4.3磨口烧瓶：圆底，500mL、100ml.
4.4布氏漏斗：100mm.
4.5分液漏斗：具塞，500ml.
4.6天平：感量0.1g.
4.7刻度试管：10mL，具塞.
4.8冰箱：0℃~5℃和-15℃~-20℃.
4.9注射器：1ml 4.10注射器针头：8#.
4.11小鼠：体重为16g~20g的健康ICR系雄性小鼠.
5检样的制备 5.1生鲜带壳的贝类 a）用清水彻底洗净贝类外壳，开壳，用清水湛洗内部去除泥沙及其他外来杂质，仔细取出贝肉， 切勿割破肉体； b）收集贝肉，沥水5min，捡出碎壳等杂物，迅速冷冻，贮藏备用； c）注意不要破坏闭壳肌以外的组织，尤其是中肠腺（又称消化盲囊，组织量暗绿色或褐绿色）.
开壳前不能加热或用麻醉剂.
5.2冷冻贝类 在室温下，使冷冻的样品（带壳或去壳的）呈半冷冻状态，按5.1方法清洗、开壳、淋洗、 1
SC/T 3024-2004 取肉.
5.3取样 a）可以切取中肠腺的贝类（扇贝、胎贝、牡蛎等），称取200g贝肉后，仔细切取全部中肠腺， 将中肠腺称重后细切混合作为检样，注意不要使中肠内容物污染案板： b）对于尚未确定部位毒性的贝类及不易切取中肠腺的小型贝肉，可将全部贝肉细切、混合，作 为检样； c）为避免毒素的危害，应戴手套进行检验操作，移液管等用过的器材应在5%的次氯酸钠 溶液中浸泡1h以上，以使毒素分解：废弃的提取液等也应用5%的次氯酸钠溶液处 理.
6提取 6.1取5.3a）处理的中肠腺，或5.3b）处理的200g贝肉置于均质杯内，均质2min.
6.2加3倍量丙酮，与样品充分搅拌均匀后，用布氏漏斗抽滤并收集提取液.
对残渣以检样两倍量 丙酮再次抽滤两次，合并抽滤液.
6.3将抽提液移人500mL的磨口烧瓶中，减压浓缩（旋转蒸发器，56C）去除丙酮，直至在液体 表面分离出油状物.
6.4将浓缩液移人分液漏斗内，以100mL～200mL乙醚和少量的水洗下粘壁部分，轻轻振荡（不 能生成乳浊液），静置分层后，去除水层（下层），用相当乙醚半量的蒸馏水洗乙醚层两次，再将乙醚 层移人250mL的磨口烧瓶中，减压浓缩（旋转蒸发器，35℃）去除乙醚.
6.5以少量乙醚将浓缩物移人100mL磨口烧瓶中，再次减压浓缩去除乙醚.
6.6以1%吐温-60生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释到10mL.
此时1mL试液相当于20g 去壳贝肉的重量，以此悬浮液作为试验原液.
6.7以试验原液注射小鼠，24h内3只均死亡时，需将试验原液进一步稀释，再注射小鼠.
稀释前， 应先振荡使溶液成均匀悬浮液，再取部分试液以1%吐温-60生理盐水稀释.
7小鼠试验 7.1以振荡器使试液或其稀释液成为均匀的悬浮液.
7.2将每只小鼠称重，每三只小鼠为一组，分别将1mL试液注射到小鼠腹腔中.
7.3同时，另取三只小鼠作为对照组，注射1mL1%吐温-60生理盐水于腹腔中.
7.4观察自注射开始到24h后的小鼠存活情况，求出一组三只中死亡两只及两只以上的最小注 射量.
7.5小鼠注射腹泻性贝毒后的症状为运动不活泼，大多呼吸异常，致死时间长.
8结果计算和表述 8.1毒力的计算 使体重16g~20g的小鼠在24h死亡的毒力为1个小鼠单位（MU）.
样品中DSP毒力的计算，按表1选择24h内死亡两只及两只以上鼠的最小注射量及最大稀释倍 数进行计算.
8.2注射量与毒力的关系 注射量与毒力的关系见表1.
2
SC/T3024-2004 表1注射量与毒力的关系 试验液 注射量 检样量 奉力 mlL. g MU/g 原液 1.0 20 0.05 原液 0.5 10 0.1 2倍稀释液 1.0 10 0.1 2倍稀释液 0.5 5 0.2 4倍稀释液 1.0 5 0.2 4倍稀释液 0.5 2.5 0.4 8倍稀释液 1.0 2.5 0.4 8倍稀释液 0.5 1.25 0.8 16倍稀释液 1.0 1.25 0.8 16倍稀释液 0.5 0.625 1.6 以中肠腺为检样时，相当于含有中肠腺的去壳贝肉量.
