ICS 67.050 B 50 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T 3029-2006 水产品中甲基睾酮残留量的测定 液相色谱法 Determination ofmethyltestosterone residues in fishery products Liquid chromatographymethod 2006-07-10发布 2006-10-01实施 中华人民共和国农业部发布
SC/T3029-2006 前言 本标准附录A为资料性附录.
本标准由中华人民共和国农业部提出.
本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口.
本标准起草单位：中国海洋大学、国家水产品质量监督检验中心.
本标准主要起草人：林洪、江洁、李兆新、曹立民、付晓婷.
SC/T3029-2006 水产品中甲基辜酮残留量的测定 液相色谱法 1范围 本标准规定了水产品中甲基睾酮残留量的液相色谱测定方法.
本标准适用于水产品可食部分中甲基睾酮残留量的测定.
2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.
凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3原理 以乙醚提取样品中的甲基睾酮，经过液-液萃取，用Cs柱进行色谱分离，利用甲基睾酮具有紫外特 征吸收，外标法定量.
4试剂 试剂应无干扰峰，分析纯试剂应重蒸.
水应符合GB/T6682一级水的要求.
4.1甲基睾酮标准品：纯度≥98%.
4.2甲醇：色谱纯.
4.3甲醇溶液：甲醇：水=4:1.
4.4石油醚：分析纯.
4.5无水乙醚：分析纯.
4.6甲基睾酮标准储备液：准确称取甲基睾酮0.0010g，用甲醇溶解，定容于50mL容量瓶中，使成浓 度为20pg/mL的标准溶液，-18C存放，存放时间不超过6个月.
4.7甲基睾酮标准工作液：使用前用甲醇稀释成1pg/mL工作液，可4C暂时存放.
5仪器 5.1液相色谱仪：配紫外检测器.
5.2电子天平：感量0.0001g.
5.3匀浆机.
5.4磁力搅拌器.
5.5离心机：最大转速5000r/min.
5.6振荡器.
5.7减压旋转蒸发器.
5.8鸡心瓶：50mL
SC/T3029-2006 5.9具塞玻璃离心管：10mL.
5.10离心管：50mL.
5.11聚四氟乙烯膜：孔径0.45m 6操作方法 6.1样品处理 取水产品可食部分，切为不大于0.5cm×0.5cm×0.5cm的小块后混匀，充分匀浆，取5.00g（精确 到0.01g）于50mL烧杯中.
6.2分离纯化 6.2.1提取 向烧杯中加人15mL乙醚，磁力搅拌15min，转移至50mL离心管中，用5mL乙醚洗净烧杯，合并 至离心管，5000r/min离心10min，所得上清液转移至鸡心瓶；残渣用15mL乙醚按上述方法再提取一 次，所得上清液合并至鸡心瓶，在40C左右水浴条件下减压旋转蒸发至干，残渣中加人5mL甲醇溶液 清洗瓶壁，溶液转移至10mL具塞玻璃离心管中.
6.2.2纯化 加人4mL的石油醚至上述离心管中，加塞剧烈振荡1min～2min，4000r/min离心10min，用滴管 吸弃上层石油醚层；下层加人4mL的石油醚按上述方法再洗涤一次.
下层甲醇溶液在40℃左右水浴 条件下减压旋转蒸发至约0.5mL，转移至10mL具塞离心管.
加人2mL水清洗瓶壁，合并水溶液，加 人4mL的乙醚，震荡1min~2min，混匀，4000r/min离心10min，吸取上层乙醚层于鸡心瓶中；下层用 4mL乙醚再提取一遍，吸取上层，合并至鸡心瓶中.
在40C左右水浴条件下减压转蒸发至干，准确加 人1mL流动相溶解残渣.
经聚四氟乙烯膜过滤，待上机分析.
6.3测定 6.3.1测定条件 6.3.1.1色谱柱：Cg柱，250mm×4.6mm，柱填料粒径5um；或相当者.
6.3.1.2流动相：甲醇：水=70:30；流速：0.8mL/min 6.3.1.3柱温：30℃.
6.3.1.4进样量：20L 6.3.1.5检测波长：254nm 6.3.2色谱分析 分别注人20L浓度为1pg/mL标准工作溶液和样品提取溶液于液相色谱仪中，按上述色谱条件 进行色谱分析，记录峰面积，响应值均应在仪器检测的线性范围之内.
根据标准样品的保留时间定性， 外标法定量.
标准品色谱图见附录A.
7结果 7.1计算 不准 样品中甲基睾酮的含量按公式（1）计算.
As × m （1） 式中： X一样品中甲基睾酮含量，单位为微克每千克（pg/kg)； Cs-标准溶液中甲基睾酮含量，单位为微克每毫升（pg/mL）； 2
SC/T3029-2006 A-试样液中甲基睾酮的峰面积； V-样品提取物溶液体积，单位为毫升（mL）； As-标准溶液中甲基睾酮的峰面积； m-样品重量，单位为克（g).
7.2方法回收率 本方法的回收率≥75%.
7.3方法检测限 本方法检测限：10pg/kg.
7.4方法重复性 本方法重复性小于10%.
7.5方法的线性范围 本方法的线性范围：0.05pg/mL~10pg/ml.
