ICS 67.050 B50 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T 3041-2008 水产品中苯并（a）芘的测定 高效液相色谱法 Determination of benzo(a)pyrene in aquatic products High performance liquid chromatography 2008-08-07发布 2008-08-07实施 中华人民共和国农业部发布
SC/T3041-2008 前言 本标准的附录A为资料性附录.
本标准由中华人民共和国农业部渔业局提出.
本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口.
本标准起草单位：中国水产科学研究院南海水产研究所.
本标准主要起草人：杨贤庆、陈胜军、李来好、岑剑伟、郝淑贤、威勃、马海霞.
SC/T 3041-2008 水产品中苯井（a）芘的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了水产品中苯并（a）芘的高效液相色谱测定方法.
本标准适用于水产品及水产加工品中苯并（a）花的测定.
2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款.
凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 SC/T3016水产品抽样方法 3方法原理 试样经氢氧化钾皂化后用正已烷提取，通过固相柱净化，用正已烷二氯甲烷溶液洗脱，旋转蒸发器 蒸干，残渣用乙晴溶解，经反相色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量.
4试剂 除特别说明外，所用试剂均为分析纯.
4.1水：符合GB/T6682一级水的要求.
4.2乙睛：色谱纯.
4.3甲醇.
4.4正已烷.
4.5二氯甲烷.
4.6无水硫酸钠：650℃下灼烧4h，冷却至室温，贮存于干燥器中备用.
4.7固相萃取柱：佛罗里柱（Florisil），250mg，3mL，使用前活化. 4.850%氢氧化钾溶液：称取50.0g氢氧化钾加适量蒸馏水溶解，冷却后，用蒸馏水稀释定容至100 mL，摇匀即可.
4.9正已烷二氯甲烷溶液：将2mL二氯甲烷加人到6mL正已烷溶液中.
4.10苯并（a）芘标准品：纯度≥98.0%.
4.11标准贮备液：准确称取苯并（a）芘标准品0.0100g，置于100mL容量瓶中，加乙請定容至刻度， 该贮备液浓度为100μg/mL.
置4℃冰箱中密封保存（保存时间不超过3个月）.
4.12标准工作液：准确吸取1.00mL的标准贮备液，置于100mL容量瓶中，用乙晴稀释至刻度.
分 别准确吸取一定体积的该溶液，制成浓度为0.5ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0 ng/mL、150.0ng/mL、200.0ng/mL的标准工作液.
5仅器设备 5.1高效液相色谱仪：配荧光检测器.
SC/T3041-2008 5.2离心机：5000r/min. 5.3超声波震荡器.
5.4旋转蒸发器.
5.5旋涡振荡器.
5.6分析天平：感量0.01g和0.0001g.
5.7氮吹仪.
5.8高速组织接碎机. 5.9无水硫酸钠柱：砂芯玻璃层析柱中装无水硫酸钠25g.
5.10固相萃取装置.
5.11圆底烧瓶：50mL和100ml.
5.12试管：10mL.
5.13聚丙烯离心管：100ml. 5.14微孔过滤膜：孔径0.45μm.
6测定步骤 6.1试样制备 6.1.1鲜活水产品的试样制备：按SC/T3016的规定执行.
6.1.2水产加工品的试样制备：抽取至少3个包装件，取试样200g绞碎混合均匀后分为两份，一份用 于检验，另一份作为留样.
6.2提取 称取试样5g（精确至0.01g），加人250mL三角瓶中，加人25mL甲醇和50%的氢氧化钾溶液 心管中，加人20mL正已烷，旋涡混匀5min，4000r/min离心10min分层，取上层正已烷相经无水硫 酸钠柱滤人100mL圆底烧瓶中，再用15mL正已烷按上述操作重复提取水相一次.
将提取液在50℃ 正已烷清洗，合并到试管中，重复清洗一次，收集的液体留过柱用.
6.3净化 先使用3mL二氯甲烷、5mL正已烷活化固相萃取柱（4.7），流速约为2mL/min.
将提取液用10 mL正已烷洗人柱子中，再用8mL的正已烷二氯甲烷溶液（4.9）洗脱，用50mL圆底烧瓶收集洗脱液.
将洗脱液在50℃水浴中旋转蒸发浓缩，待瓶中剩下约1mL时，取下圆底烧瓶，将液体移人试管中，再加 人2mL正已烷清洗圆底烧瓶2次，合并至试管中，氮气吹干，准确加人1.00mL乙睛，超声溶解后，用 0.45um的微孔滤膜过滤，供高效液相色谐仪测定.
6.4试样测定 6.4.1色谱条件 6.4.1.1色谱柱：反相C18，250mmX4.6mm，粒度5um；或与之相当的色谱柱.
6.4.1.2流动相：乙晴水（7525).
6.4.1.3流速：1.0mL/min. 6.4.1.4柱温：35℃.
6.4.1.5检测器波长：激发波长297nm，发射波长405nm. 6.4.1.6进样量：20uL 2
SC/T30412008 6.4.2色谱分析：分别取标准工作液（4.12）和试样提取液于液相色谱仪中，按上述色谱条件进行色谱 分析，记录分析结果，响应值均应在仪器检测的线性范围之内，根据标准品的保留时间定性，外标法定 量.
标准品色谱图参见附录A.
6.5空白试验 不加试样，在相同试验条件下，与试样测定的同批进行空白试验， 7计算 试样中苯并（a)芘的含量按式(1)计算.
计算结果需扣除空白值.
结果保留3位有效数字.
7m1 （1) 式中： X-试样中苯并（a）芘的含量，单位为微克每千克（μg/kg）： C--试样中苯并（a）芘的含量，单位为微克每毫升（μg/mL）； m-试样质量，单位为克（g)； V-试样定容的体积，单位为毫升（mL）.
8方法灵敏度、准确度和精密度 8.1灵敏度 本方法最低检出限为0.1μg/kg，最低定量限为0.5μg/kg.
8.2准确度 本方法添加浓度为0.5μg/kg~40μg/kg时，回收率为75%~110%.
8.3精密度 本方法批内和批间的相对标准偏差<15%. 3
