ICS 65.020.30 B 41 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T 7201.4-2006 鱼类细菌病检疫技术规程 第4部分：荧光假单胞菌赤皮病诊断方法 Rules for quarantiningbacterial diseases of fish Part 4:Diagnostic method for Red-skin disease 2006-12-06发布 2007-02-01实施 中华人民共和国农业部发布
SC/T7201.4-2006 前言 SC/T7201《鱼类细菌病检疫技术规程》分为五个部分： 第1部分：通用技术； 一第2部分：柱状嗜纤维菌烂鳃病诊断方法； 一第3部分：嗜水气单胞菌及豚鼠气单胞菌肠炎病诊断方法； 第4部分：荧光假单胞菌赤皮病诊断方法； 一第5部分：白皮假单胞菌白皮病诊断方法.
本部分为SC/T7201的第4部分.
本部分由中华人民共和国农业部渔业局提出.
本部分由全国水产标准化技术委员会归口.
本部分起草单位：中国水产科学研究院长江水产研究所、中国水产科学研究院珠江水产研究所.
本部分主要起草人：何力、邹为民、徐忠法、姜兰、周瑞琼、罗晓松.
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SC/T 7201.4-2006 鱼类细菌病检疫技术规程 第4部分：荧光假单胞菌赤皮病诊断方法 1范围 本部分规定了鱼类荧光假单胞菌赤皮病（red一skindisease）的诊断方法.
本部分适用于鱼类赤皮病的诊断.
2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本部分的引用而成为本部分的条款.
凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然面，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分.
SC/T7014-2006水生动物检疫实验技术规范 SC/T7201.1一2006鱼类细菌性病检疫技术规范第1部分：通用技术 3病原体与流行情况 3.1主要病原体 荧光假单胞菌（Pseudomonasfluorescens）.
3.2流行情况 草鱼、青鱼、鲤、鲫、团头舫等多种淡水鱼均可患此病.
全国各地，一年四季都有流行，尤其是在捕 捞、运输或北方越冬后，造成鱼体受伤，最易暴发流行.
4试剂 除非另有说明，在检验中仅使用确认为分析纯的试剂、蒸馏水或去离子水.
常用试剂见SC/T 7201.1-2006的3.1；试剂与染色液的配制应符合SC/T7201.1-2006中附录A的规定.
4.1发酵试剂管（甘露糖、山梨醇、阿拉伯糖、葡萄糖、海藻糖、肌醇）.
5培养基 5.1普通营养琼脂培养基 5.2蛋白陈葡萄糖磷酸盐培养液 5.3硝酸盐液体培养基 5.1、5.2和5.3培养基的配制见SC/T7201.1-2006中附录B.
息服务平 6设备和器械 应符合SC/T7201.1-2006第4章的规定.
7采样 应符合SC/T7014-2006第4章的规定.
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SC/T 7201.4-2006 8诊断 8.1临床诊断 8.1.1活动情况 病鱼行动迟缓，离群独游.
8.1.2外部检查 体表出血发炎，鳞片脱落，尤其是鱼体两侧及腹部最为明显；鳍条的基部或整个鳍条充血，鳍的末稍 端腐烂，常烂去一段，鳍条间的软组织也常被破坏，使鳍条呈扫带状，在体表病灶处常继发水霉感染；部 分鱼的上、下颌及鳃盖也充血发炎，鳃盖内表面的皮肤常被腐蚀成一圆形或不规则形的透明小窗，显示 与细菌性烂病的复合感染.
8.2实验室诊断 8.2.1样品处理 用刀片刮除病灶腐烂部分后用接种环挂取病料，在普通营养琼脂培养基上平板划线，25℃～30℃培 养24h.
8.2.2菌落形态 培养基上菌落圆形，边缘整齐，呈灰白色，半透明，20h开始产生绿色或黄绿色的色素，弥漫培养基.
8.2.3革兰氏染色 在一干净载玻片上滴加一滴蒸馏水；取菌落少许与蒸馏水混合并均匀涂布，自然干燥，火焰固定；加 草酸铵结晶紫染液染1min~2min，加水冲洗；加革兰氏染色用碘液作用1min～2min，加水冲洗；加复 红酒精染液染50s~60s，加水冲洗.
干燥镜检.
被染成紫蓝色为阳性.
荧光假单胞菌为阴性.
8.2.4生化检验 8.2.4.1甲基红和V.P试验 用接种环挑取单个菌落少许，接种于蛋白陈葡萄糖磷酸盐培养液，置37℃培养24h后，分别取2ml 培养液于两只小管中.
前者加甲基红试剂2滴轻摇后观察，出现红色为阳性.
后者加人6%c蔡酚酒精 溶液1mL，再加人40%氢氧化钾溶液0.4mL，充分振荡，室温下静置5min~30min后观察，呈红色反 应为阳性.
荧光假单胞菌均为阴性.
8.2.4.2发酵试验 用接种环或接种针挑取单个菌落少许，分别接种甘露糖、山梨醇、右旋阿拉伯糖、葡萄糖、海藻糖、肌 醇等6种发酵试验管.
28℃培养24h.
凡试验管颜色从紫色变为黄色，表明细菌可发酵该种糖类，判定 为阳性.
荧光假单胞菌可发酵以上6种糖类.
8.2.4.3氧化酶试验 将少许菌落涂布于浸有1%盐酸四甲基对苯胺的滤纸上.
10s内观察涂布处的颜色，出现红色则为 阳性.
荧光假单胞菌应为阳性.
8.2.4.4吲噪试验 在长有细菌的培养基上，沿管壁滴加3滴～4滴吲噪试剂，若试管内壁出现红色环者，为反应阳性.
荧光假单胞菌为阴性.
8.2.4.5硫化氢试验 用接种针取少许菌落在氯化铁试管培养基穿刺接种，30C培养24h观察，培养基变黑为阳性反应.
荧光假单胞菌为阴性.
8.2.4.6硝酸盐试验 取少许菌落接种于硝酸盐液体培养基中，置30C培养24h后，加1滴-2滴格里斯氏试剂的A液 和B液.
溶液如有红色出现，则表明硝酸盐还原阳性.
荧光假单胞菌为还原阴性.
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SC/T 7201.4-2006 9判定 符合以下特性者可判定病原菌为荧光假单胞菌： a)菌落形态符合8.2.2的规定； b）发酵试验、氧化酶试验阳性； c）甲基红试验、V.P试验、革兰氏试验、吲哚试验、硫化氢试验和硝酸盐试验阴性.
临床诊断结果符合8.1的规定，病原菌判定为荧光假单胞菌，可判定为赤皮病.
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