ICS 65.020.30 B 41 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T 7205.1-2007 牡蛎包纳米虫病诊断规程 第1部分：组织印片的细胞学诊断法 DiagnosticProtocols for Bonamiosis of Oyster- Part 1:Cytological Method with Tissue Imprints 2007-09-14发布 2007-12-01实施 中华人民共和国农业部发布
SC/T 7205.1-2007 前言 SC/T7205《牡蛎包纳米虫病诊断规程》分为三个部分： 第1部分：组织印片的细胞学诊断法； 一第2部分：组织病理学诊断法； 一第3部分：透射电镜诊断法.
本部分为SC/T7205的第1部分.
本部分的附录A和附录B为规范性附录.
本部分由中华人民共和国农业部渔业局提出.
本部分由全国水产标准化技术委员会归口.
检疫局.
本部分主要起草人：杨冰、黄健、陈爱平、江育林、王崇明、王秀华、魏琦、刘莉.
SC/T 7205.1-2007 牡蛎包纳米虫病诊断规程 第1部分：组织印片的细胞学诊断法 1范围 SC/T7205的本部分规定了牡蛎包纳米虫病组织印片的细胞学诊断法的原理、试剂与材料、仪器设 备、操作步骤和结果判定.
本部分适用于现场或基层实验室对患病牡蛎及其他贝类个体进行包纳米虫病的普查和初步诊断.
2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用面成为本标准的条款.
凡是注日期的引用文件，其随后 的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本.
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.
SC/T7202.1一2007班节对虾杆状病毒病诊断规程第1部分：压片显微镜检查法 SC/T7202.3一2007斑节对虾杆状病毒病诊断规程第3部分：组织病理学诊断法 3原理 3.1牡婚包纳米虫及其病理学特征 包纳米虫病是由牡蛎包纳米虫（Bomamiaostreae）、致死包纳米虫（Bomamia ezitiosus）和鲁夫来小胞 虫（Mikrocytosroughleyi）所引起的.
包纳米虫主要寄生在宿主的血细胞细胞质内，也可在消化道的上皮细胞或间质细胞间游离存在，尤 其在坏死的结缔组织中更易发现，有时在鳃和外套膜出现黄的色变和广泛的灰白色小溃疡病灶，但多数 受感染的牡蛎外观正常.
病灶先在鳃、外套膜和消化腺的结缔组织中出现，血细胞内的包纳米虫随着其 数量剧增面很快扩散全身，出现浓密的血细胞浸润，最终导致牡蛳死亡.
包纳米虫感染的病理学特征与 受感染的宿主种类和数量有关.
包纳米虫病在全年都可能发生，但其患病率和感染强度随季节变暖而增加.
这两种包纳米虫的潜 伏期长达五个月，用组织学的切片染色法或用细胞学的组织印迹法，在此期间可能检测不到感染.
牡蛎属（Ostrea spp.）、蒋螺属（Tiostrea spp.）和巨蛎属（Crasostrea spp.）的种可能都是易感宿 主.
3.2技术原理 通过光镜观察经吉姆萨氏染液染色后的组织印片，鉴别包纳米虫的形态和数量，从而初步判断被检 样品是否感染包纳米虫.
4试剂和材料 4.1除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和蒸谣水或去离子水或相当纯度的水.
4.2甲醇.
4.3中性树胶.
4.4 NaCl.
SC/T 7205.1-2007 4.5吉姆萨氏染液按附录A的规定.
4.6戴维森氏AFA（Davidson'sAFA)固定液按SC/T7202.3-2007（班节对虾杆状病毒病诊断规程 第3部分：组织病理学诊断法）附录A的规定.
4.73%戊二醛按SC/T7205.3-2007（牡蛎包纳米虫病诊断规程第3部分：透射电镜诊断法）附录 A的规定.
4.81%镀酸按SC/T7205.3-2007（牡蛎包纳米虫病诊断规程第3部分：透射电镜诊断法）附录A 的规定.
4.90.22pm滤膜.
4.10吸水纸.
5仪器设备 5.1显微镜：带高倍镜（40×）和油镜（100×）.
5.2载玻片.
5.3盖玻片.
5.4解剖刀.
5.5镊子.
6操作步骤 6.1印片制作 6.1.1样品的采集按附录B执行.
6.1.2取活体牡蛳的卵巢或心脏组织（心室）在载玻片上印迹，制成涂片，涂片自然干燥后在甲醇中固 定5min~7min.
空气干燥.
6.2染色 6.2.1将干燥的涂片移人吉姆萨氏染液中染色，3张～4张片子用不同的染色时间染色15min~50min 作试样.
6.2.2染色后用缓慢的自来水流小心冲洗.
6.2.3让玻片在室温空气中晾干.
6.2.4中性树胶封片.
7结果判定 7.1在油镜下放大1000倍，搜索不同的视野进行检查.
光镜下包纳米虫大小约2umm～5um，在受感 染的牡蛎血细胞内外均可见到.
虫体细胞质呈嗜碱性，细胞核呈嗜酸性.
组织印片法观察到的虫体比 用普通组织学染色后观察到的个体要大.
7.2此寄生虫在亲本中主要感染上皮组织，心脏组织的印片不适用于对亲本的诊断.
服务平 2
SC/T 7205.1-2007 附录A （规范性附录） 试剂配方 A.1吉姆萨氏染液 0.8g吉姆萨氏染料溶于100mL由等体积甘油和甲醇组成的混合液中，以机械振荡器振荡2d~ 3d，或加人玻璃珠用手间断摇动，共3d~4d.
临用时将4mL吉姆萨氏贮存液稀释于96mL的磷酸盐 缓冲液中.
A.2磷酸盐缓冲液，pH6.8 0.067 mol/L NaHPO4 50 mL 0.067 mol/L KHPO 50 mL A.30.067 mol/L NaHPO NaHPO 9.47 g 加水溶解定容至 1 000 mL A.40.067mol/LKHPO KHPO 9.08g 加水溶解定容至 1 000 mL
