ICS 65.120 CCS B 46 NY 中华人民共和国农业行业标准 NY/T4362-2023 饲料添加剂 角蛋白酶活力的测定 分光光度法 Feedadditives-Determination ofkeratinase activity- Spectrophotometricmethod 行业标准信息服务 质 正 参考件 2023-04-11发布 发布
NY/T4362-2023 前 本文件按照GB/T1.1-2020（标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草.
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本文件由农业农村部畜牧兽医局提出.
本文件由全国饲料工业标准化技术委员会（SAC/TC76）归口.
本文件起草单位：中国农业科学院饲料研究所、山东隆科特酶制剂有限公司、福建傲农生物科技集团 股份有限公司、广州立达尔生物科技股份有限公司.
本文件主要起草人：丁宏标、钱娟娟、侯玉煌、周盛吕、陶正国、李习龙、刘胜利.
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NY/T 4362-2023 饲料添加剂角蛋白酶活力的测定 分光光度法 1范围 本文件描述了饲料添加剂角蛋白酶活力的分光光度测定方法.
本文件适用于饲料添加剂角蛋白酶产品中酶活力的测定.
本文件的方法定量限为100 U/g（U/mL).
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.
其中，注日期的引用文 件，仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于 本文件.
GB5009.5-2006食品安全国家标准食品中蛋白质的测定 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195动物饲料试样的制备 3术语和定义 下列术语和定文适用于本文件.
3. 1 角蛋白酶keratinase 产自地衣芽孢杆菌，可以降解羽毛等动植物角蛋白生成氨基酸或肽类的蛋白酶， 3. 2 角蛋白酶活力单位keratinase activityunit 在40℃、pH8.0的条件下，水解酪蛋白，每分钟产生1pg的酪氨酸的酶量为一个酶活力单位.
注：单位为U.
4原理 在一定的温度和pH条件下，角蛋白酵水堡酪蛋白底物产生含有酚基和吲噪基的氨基酸，用三氯乙酸 沉淀后，在碱性条件下，将福林试剂还原，生成磷钨钼酸，在680nm有最大吸收，其颜色的深浅与酚基氨 基酸含量成正比.
采用分光光度法测定反应液吸光值，计算角蛋白酶活力， 5试剂或材料 除非另有说明，仅使用分析纯试测， 5.1水：GB/T6682，三级.
5.2碳酸钠溶液（0.4mol/L），称取无水碳酸钠（NaCO）42.4g.用水溶解并定容至1000mL.混匀. 5.3三氯乙酸溶液（0.4mol/L）：称取三氯乙酸65.4g.用水溶解并定容至1000mL.混匀.
5.4盐酸溶液（1mol/L），取浓盐酸85ml..加水稀释并定容至1000ml.，混匀. 5.5盐酸溶液（0.1mol/L)：取10mL1mol/L盐酸溶液（5.4）.定容至100mL.混匀. 5.6氢氧化钠溶液（0.5mol/L）：取氢氧化钠20.0g-用水溶解，冷却至室温后定容至1000mL，混匀.
5.7福林（Folin）试剂：于200mL磨口回流装置中加入钨酸钠（NaWO 2HO)100.0g、钼酸钠 （NaMoO2HO）25.0g、水700mL、85%磷酸50mL、浓盐酸100mL.小火沸腾回流10h，取下回流
