BJS 食品补充检验方法 BJS 201705 食品中香兰素、甲基香兰素和 乙基香兰素的测定 2017-05-23发布 国家食品药品监督管理总局 发布
BJS 201705 食品中香兰素、甲基香兰素和 乙基香兰素的测定 1范围 本方法规定了食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的高效液相色谱-串联质谱的测定方法.
本方法适用于液体乳、稀奶油、婴幼儿配方乳粉（不包括特殊医学用途的婴幼儿配方乳粉）、要幼儿 谷类辅助食品、谷物碾磨加工品、植物油脂等食品中香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素的测定.
2原理 样品经乙晴提取后，再以正已烷除脂净化，高效液相色谱-串联质谱仪进行检测，外标法定量.
3试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂 3.1.1甲醇(CHO)：色谱纯.
3.1.2乙晴（CHN)：色谱纯. 3.1.3甲酸（CHO）：色谱纯.
3.1.4正已烷（CH）：色谱纯.
3.1.5氯化钠（NaC1）：在550C灼烧4h后备用.
3.1.60.1%甲酸水溶液：量取10mL甲酸并加人水定容至1000mL.
3.2标准品 香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素标准品纯度≥98.0%，中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相 对分子质量和结构式等信息参见附录A中表A.1， 3.3标准溶液配制 3.3.1标准储备液（1.00mg/mL）：分别称取香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素0.1g（精确至0.0001g） 标准物质于100mL容量瓶中，用甲醇溶解，并定容至刻度.
避光于一18C下保存，保存期为6个月.
3.3.2混合标准储备溶液：分别吸取上述三种标准储备液1.00mL于同一100mL容量瓶中，用乙稀 释到刻度配制成质量浓度为10μg/mL的混合标准储备溶液，避光于一18C保存，保存期为1个月.
3.3.3空白基质溶液：按照6.1规定的前处理方法操作制备空白基质溶液， 3.3.4基质混合标准系列工作溶液：分别准确吸取香兰素、甲基香兰素和乙基香兰素混合标准储备溶 160ng/mL标准系列工作溶液，临用时配制.
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BJS 201705 4仪器和设备 4.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源.
4.2涡漩混合器.
4.3超声波清洗器.
4.4离心机：转速≥5000r/min.
4.5分析天平：感量0.1mg和0.01g.
5试样制备 要幼儿谷类辅助食品、谷物碾磨加工品需粉碎混匀，使其全部可以通过425xm的标准网筛；其他 样品无需特殊制备.
6分析步骤 6.1样品的制备与提取 6.1.1婴幼儿配方乳粉、婴幼儿谷类辅助食品：称取1g样品（精确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心 管中，加人3mL水，涡振荡30s，加人7mL乙晴（3.1.2），涡振荡30s，超声处理25min，10000r/min 离心5min后，取上层清液2mL于10mL玻璃离心管中，加人1mL正已烷（3.1.4），涡混合30s， 5000r/min离心3min后，取下层清液，过滤膜（0.22um，有机相），待分析.
6.1.2液体乳（巴氏杀菌乳、灭菌乳、发酵乳等）、稀奶油：称取2g样品（精确至0.01g），置于50mL聚 丙烯离心管中，加人20mL乙晴（3.1.2），涡漩振荡30s，超声处理25min，加人1g氯化钠（3.1.5）， 10000r/min离心5min后，取上层清液2mL于10mL玻璃离心管中，加人1mL正已烷（3.1.4），涡 混合30s，5000r/min离心3min后，取下层清液，过滤膜（0.22um，有机相），待分析.
6.1.3谷物碾磨加工品（大米等）：称取1g样品（精确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加人 3mL水，涡振荡30s，加人7mL乙晴（3.1.2），涡振荡30s，超声处理25min.10000r/min离心 5min后，取上层清液过0.22pm滤膜，待分析. 6.1.4植物油脂：称取1g样品（精确至0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加人1mL水和10mL 乙（3.1.2），涡振荡30s，超声处理25min，加人1g氯化钠（3.1.5），10000r/min离心5min后，取 3min后，取下层清液，过滤膜（0.22pm，有机相）.待分析.
6.2仪器参考条件 6.2.1色谱条件： a）色谱柱：XDBC柱，4.6mm×50mm，1.8um，或性能相当者； b）流动相：A为0.1%甲酸水溶液，B为甲醇，梯度洗脱条件见表1； c）流速：0.3mL/min； d）柱温：30℃； e）进样量：2pL.
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BJS 201705 表1梯度洗脱条件 时间/min 流动相A/% 流动相B/% o 75 25 0.5 75 25 2 50 50 6 50 50 7 10 90 9 10 90 12 75 25 6.2.2质谱条件： a）离子源：电喷雾离子源； b）扫描方式：正离子扫描（ESI十）； c）检测方式：多反应监测（MRM）： 离子对及其他质谱参数参见附录B中表B.1.
6.3测定 6.3.1标准曲线的制作 用混合标准系列工作溶液（3.3.4）分别按仪器参考条件（6.2）进行测定，得到相应的标准溶液的色谱 峰面积，以混合标准工作液的质量浓度为横坐标，以色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线.
6.3.2定性测定 在相同试验条件下测定样品和基质混合标准工作溶液，记录样品和标准工作溶液中目标物的保留 时间.
若样品中检出与基质混合标准工作溶液（3.3.4）中待测物保留时间一致的色谱峰，且其定性离子 与浓度相当的标准溶液中相应的定性离子的相对丰度相比偏差不超过表2规定的范围，则可以确定样 品中检出相应的待测物.
表2定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 20~50 10~20 ≤10 允许的相对偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 6.3.3定量测定 将样品溶液（6.1）按仪器参考条件（6.2）进行测定，得到相应的样品溶液的色谱峰面积，根据标准曲 线查得待测液中各组分的质量浓度.
样品中各待测组分的响应值应在标准曲线的线性响应范围内，如 果含量超出线性范围，则重新取样分析，用乙晴稀释到适当质量浓度后测定，混合标准工作溶液的高效 液相色谱-串联质谱MRM色谱图参见图C.1~图C.3.
