BJS 食品补充检验方法 BJS201908 水产品及水中丁香酚类化合物的测定 2019-04-01发布 国家市场监督管理总局 发布
806107 S58 水产品及水中丁香酚类化合物的测定 1范围 本方法规定了水产品及水中丁香酚类化合物的气相色谱-质谱测定方法.
本方法适用于淡水虾、淡水鱼、海水虾、海水鱼等水产品及水中丁香酚类化合物的测定.
2原理 用乙晴提取试样中的丁香酚类化合物后，经乙睛饱和正已烷除脂净化或过滤净化（水样），采用气相 色谱-质谱联用仪检测，外标峰面积法定量.
3试剂、材料和标准溶液配制 除非另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂与材料 3.1.1乙晴（CHCN）：色谱纯.
3.1.2正己烷（CH）：色谱纯 3.1.3无水硫酸钠（NaSO）.
3.1.4无水硫酸镁（MgSO，）.
3.1.5二甲亚矾（CHOS，英文缩写：DMSO）.
3.1.6乙晴饱和正已烷溶液：量取200mL正已烷（3.1.2）于250mL分液漏斗中，加人适量乙晴 （3.1.1），剧烈振摇数分钟，静置分层，弃去下层乙晴.
3.1.7陶瓷均质子：适用于50mL萃取管的陶瓷均质子.
3.2丁香酚类化合物标准品 6种标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥95%.
表1丁香酚类化合物标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量 序号 中文名称 英文名称 CAS 号 分子式 相对分子质量 1 丁香酚 Eugenol 97-53-0 C H O 164 20 2 甲基丁香酚 Methyleugenol 93-15-2 CH O 178 23 f 异丁香酚 Isoeugenol 97-54-1 CHO 164 20 顺式-甲基异丁香酚 Methyl Isoeugenol -9-6 CHO; 178 23 5 乙酸丁香酯酯 Eugenyl Acetate 93-28-7 C HO 206 24 6 乙酰基异丁香酚 Acetyl Isoeugenol 8-62-86 C HO 206 24
BJS 201908 3.3标准溶液配制 3.3.1丁香酚类化合物标准储备溶液：分别准确称取6种丁香酚类化合物标准品（3.2）100.0mg（精确 至0.0001g），用乙晴溶解并定容至100mL，此溶液质量浓度均为1mg/mL.
4℃避光密封保存，有效 期3个月， 3.3.2丁香酚类化合物标准中间溶液：将6种丁香酚类化合物标准储备溶液（3.3.1）用乙晴稀释成 10pg/mL的混合标准中间溶液，4C避光密封保存，有效期1个月.
3.3.3空白基质溶液：称取空白试样，按照5.1规定的样品预处理方法操作制备.
3.3.4标准系列工作溶液：用空白基质溶液（3.3.3）将标准中间溶液（3.3.2）稀释成最终质量浓度为 40 ng/mL、100 ng/mL 200 ng/mL500 ng/mL1 000 ng/mL的标准系列工作溶液，临用时配制.
4仅器和设备 4.1气相色谱-质谱联用仪：配有电子轰击电离源（EI）.
4.2涡濮振荡器.
4.3超声波清洗器.
4.4台式均质仪.
4.5分析天平：感量分别为0.1mg和0.01g. 4.6离心机：转速≥5000r/min.
4.7聚丙烯离心管：15mL和50mL 4.8移液器:200μl.和 10mL. 5分析步骤 5.1试样的制备与保存 淡水鱼、淡水虾、海水鱼及海水虾：取样本，先将鱼体、虾体表面杂质洗净，鱼去鳞、去皮，取肌肉部 分；虾去壳、头，取可食部分；试样经均质混匀，一18C以下冷冻保存，备用.
水样：取样本，充分混匀，一18℃以下冷冻保存，备用.
5.2试样前处理 5.2.1水产品（淡水鱼、淡水虾、海水鱼及海水虾） 取试样，常温自然解冻后，称取2.0g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人5g无水硫酸 离心5min，上清液转至另一50mL离心管中：残渣中再加人10mL乙晴重复提取一次，合并上清 液；再加入5mL乙晴饱和的正已烷，涡激振荡1min，5000r/min离心5min，弃去正已烷层；乙腾层加 人50μL的二甲基亚砜（DMSO），40C氮吹至近干，用乙腾定容至1mL，混匀，过0.45μm微孔滤膜， 供气相色谱-质谱联用仪分析.
5.2.2水样 取水样，常温自然解冻后，称取5.0g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加人10mL乙， 涡激振荡5min，再加人5.0g无水MgSO，和一颗陶瓷均质子，涡濮振荡5min，5000r/min离心 5min，准确移取上清液4mL 加人50pL的DMSO，40℃氮吹至近干，用乙晴定容至1mL，混匀，过 2
BJS 201908 0.45pm微孔滤膜，供气相色谱-质谱联用仪分析.
5.3仪器参考条件 5.3.1气相色谱参考条件： a）色谱柱：DB-170130.0m×0.25mm×0.25μm或性能相当者； b） 升温程序：初始温度100C，保持1min，以6℃C/min升温至200℃C，再以25C/min升温至 260℃，保持5min; c）进样口温度：230℃； d）载气：氮气，纯度≥99.999%，流速1.0mL/min； e）进样方式为不分流进样； f）进样量：1gL. 5.3.2质谱参考条件： a）电离方式：电子轰击电离源（E1）： b）电离能量：70eV； c） 传输线温度：280C； d）离子源湿度：230℃； e） 溶剂延迟时间：6.00min； 测定方式：选择离子监控（SIM），各化合物定量及定性离子见表2.
表26种丁香酚类化合物参考保留时间及定性、定量离子 名称 保留时间/min 定量离子m/= 定性离子1m/=定性离子2m/= 定性离子3m/ 丁香酚 10 56 164 149 131 103 甲基丁香酚 10 97 178 163 147 103 12 65 164 149 131 103 顺式-甲基异丁香酚 13 04 178 163 107 91 乙酸丁香酚酯 14 08 164 149 206 131 乙酰基异丁香酚 15 92 164 149 206 131 5.4定性确证 在5.3仪器条件下，试样待测液和标准工作溶液的目标化合物在相同保留时间处（变化范围在 土0.5%内）出现，并且对应质谱碎片离子的质荷比与标准工作溶液的质谱图一致，其丰度比与标准工作 溶液相比应符合表3，可定性目标化合物.
6种丁香酚类化合物总离子流图参见附录A.
表3气相色谱-质谱定性确证相对离子丰度最大容许误差 相对离子丰度/% k>50 < 01<0 k≤10 允许的相对偏差/% ±10 ±15 ±20 ±50 5.5定量测定 5.5.1标准曲线的制作 将6种丁香酚类化合物标准系列工作溶液（3.3.4）按仪器参考条件（5.3）进行测定，得到相应的标准 BJS 201908 系列工作溶液的定量离子色谱峰面积. 以标准系列工作溶液的质量浓度为横坐标，以定量离子色谱峰 的峰面积为纵坐标绘制标准曲线. 5.5.2试样溶液的测定 将试样溶液（5.1）按仪器参考条件（5.3）进行测定，得到相应的试样溶液的质量色谱峰面积. 根据 标准曲线得到试样溶液中丁香酚类化合物的质量浓度. 试样溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的 线性范围内. 若试样溶液中待测物的质量浓度超出标准曲线范围时，应对样品溶液作相应稀释后再进 行测定. 6结果计算 试样中各种丁香酚类化合物含量按式（1）计算： pxV Xf 式中： X，一试样中丁香酚类化合物的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 从标准曲线查出的试样溶液中丁香酚类化合物的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）： V试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）； m-试样质量，单位为克（g）； f稀释倍数. 计算结果以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字. 7精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算数平均值的20%. 8准确度 本方法对淡水虾、海水虾、淡水鱼、海水鱼及水中6种丁香酚类化合物加标浓度为0.02mg/kg~ 0.10mg/kg时，回收率在60%~120%之间. 9检出限和定量限 当淡水虾、海水虾、淡水鱼及海水鱼取样量为2.0g，水取样量为5.0g，定容体积为1mL时，本方法 中6种丁香酚类化合物检出限均为0.01mg/kg，定量限均为0.02mg/kg.
