BJS 食品补充检验方法 BJS202403 畜禽类食品中松香酸、脱氢松香酸的测定 2024-12-22发布 国家市场监督管理总局 发布
BJS 202403 畜禽类食品中松香酸、脱氢松香酸的测定 1范围 本方法规定了畜禽类食品中松香酸和脱氢松香酸的液相色谱-串联质谱测定方法.
本方法适用于畜禽生鲜可食表皮、生鲜肌肉组织及畜禽熟制品中松香酸和脱氢松香酸的含量测定.
2原理 试样中的松香酸和脱氢松香酸经乙睛提取后，固相萃取柱净化，高效液相色谱-串联质谱测定，以尔 代脱氢松香酸为内标内标法定量.
3试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂 3.1.1乙晴（CHN）. 3.1.2甲醇（CHO）：色谱纯.
3.1.3甲酸（CHO）：色谱纯.
3.1.4氨水（NHHO）：质量分数为25%~28%.
3.2试剂配制 3.2.11.25%氨水溶液：吸取氨水（3.1.4）5mL，用水稀释至100mL，混匀.
3.2.20.2%甲酸水溶液：吸取甲酸（3.1.3)2mL，用水稀释至1000mL，混匀.
3.2.30.2%甲酸甲醇溶液：吸取甲酸（3.1.3）200L，用甲醇（3.1.2）稀释至100mL，混匀.
3.3标准品 松香酸、脱氢松香酸和脱氢松香酸-D：标准品的CAS号、分子式、相对分子质量等基本信息见表1， 纯度均不小于95%或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.
表1标准品基本信息 中文名称 英文名称 CAS 号 分子式 相对分子质量 松香酸 Abietic acid 514-10-3 C H O; 302 45 脱氢松香酸 Debydroabietic acid 1740-19-8 CHO; 300 44 脱氢松香酸-D Dehydroabietic acid-D 213775-59-8 CH O D 302 45 3.4标准溶液配制 3.4.1标准储备液 3.4.1.1松香酸标准储备液（100μg/mL）：称取松香酸标准品10mg（精确至0.01mg），置于小烧杯中，
BJS 202403 用甲醇溶解并定容至100mL容量瓶中.
在一18℃及以下避光保存，有效期3个月.
小烧杯中，用甲醇溶解并定容至100mL容量瓶中.
在一18C及以下避光保存，有效期3个月.
3.4.1.3内标物储备液（100μg/mL）：称取脱氢松香酸-D:标准品10mg（精确至0.01mg），置于小烧杯 中，用甲醇溶解并定容至100mL容量瓶中.
在一18℃及以下避光保存，有效期3个月.
3.4.2标准中间液 3.4.2.1混合标准中间液：分别准确移取0.1mL松香酸标准储备液（3.4.1.1）和脱氢松香酸标准储备液 （3.4.1.2）于10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度.
其中松香酸质量浓度为1μg/mL.脱氢松香酸质量 浓度为2.5μg/mL.临用现配.
3.4.2.2内标物中间液（1μg/mL)：准确移取0.1mL内标物储备液（3.4.1.3）于10 mL容量瓶中.用甲 醇稀释至刻度.
临用现配.
3.4.3标准工作液 分别移取 0 mL、0.02 mL、0.04 mL、0.1mL、0.2 mL、0.4 mL、1.0mL的混合标准中间液（3.4.2.1) 和0.25mL内标物中间液（3.4.2.2）于10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度.
其中松香酸质量浓度分别 为 0 ng/mL、2 ng/mL、4 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、40 ng/mL、100 ng/mL.
脱氢松香酸质量浓度 分别为 0 ng/mL 5 ng/mL、10 ng/mL 25 ng/mL、50 ng/mL 100 ng/mL 250 ng/mL 脱氢松否酸-D; 质量浓度为25ng/mL.
临用现配.
3.5.1具塞离心管：50mL.
3.5.2固相萃取柱（60mg/3mL）：填料为季胺基团键合聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物，或性能相当者.
使用前依次用3mL乙腾、3mL水活化.
3.5.3微孔滤膜：有机相，孔径0.22pm. 4仪器和设备 4.1高效液相色谱-三重四极杆质谱仪配有电喷雾离子源（ESI源）.
4.2电子天平：感量分别为0.01g和0.01mg. 4.3组织接碎机.
4.4氮吹浓缩装置.
4.5离心机：转速不低于8000r/min. 4.6涡旋混合器.
4.7固相萃取装置.
4.8超声波发生器.
5分析步骤 5.1试样制备与保存 若生鲜样品含皮，则取可食皮肤部分；若生鲜样品不含皮，则取近皮的可食性组织：若样品为熟制 品，则取可食部分.
取不少于100g上述样品，剪碎或切碎后经组织捣碎机混合均匀，置于洁净密封袋 中，于一18C以下冷冻保存备用，避免交叉污染.
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BJS 202403 5.2提取 称取2g试样（精确至0.01g）于具塞离心管（3.5.1）中，加人50μL内标物中间液（3.4.2.2），加人 10mL乙睛（3.1.1)，加盖后混匀，超声提取20min，8000r/min离心5min，移取上清液5mL转移至另 一个具塞离心管（3.5.1）中，加人5mL1.25%氨水水溶液（3.2.1），混匀，待净化.
5.3净化 将上述待净化液（5.2）全部通过已经活化的固相萃取柱（3.5.2），依次用3mL水、4mL甲醇（3.1.2） 淋洗小柱，弃去全部流出液，吹干小柱，最后用3mL0.2%甲酸甲醇溶液（3.2.3）洗脱，收集洗脱液，洗脱 液在40℃C下用氮气吹至近干，准确加人甲醇（3.1.2）1.0mL至残渣中，涡旋1min混匀，过0.22μm微 孔滤膜（3.5.3），供测定.
5.4测定条件 5.4.1参考液相色谱条件 参考液相色谱条件如下： a）色谱柱：C色谱柱，100mm×2.1mm（i.d.），粒径1.8μm；或相当者； b）流动相：A相为0.2%甲酸水溶液（3.2.2），B相为甲醇（3.1.2），梯度洗脱条件见表2； c）流速：0.3mL/min; d）柱温：35℃； e）进样量：5xL. 表2梯度洗脱程序 时间/min 流动相A/% 流动相 B/% 0 25 75 6 20 80 13 20 80 13.5 0 100 15.5 0 100 16 25 75 18 25 75 5.4.2参考质谱条件 参考质谱条件如下： a）离子源：电喷雾离子源（ESI源）； b）检测方式：多反应监测（MRM）： c）扫描方式：正离子模式扫描； d）雾化气和干燥气均为氮气、加热气为空气、碰撞气为氯气，或其他合适气体.
使用前应调节相 应参数使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件见附录A.
定量离子对、定性离子对和碰撞能量 信息见表A.1.
BJS 202403 5.5标准曲线的制作 将松香酸和脱氢松香酸标准系列工作液（3.4.3）由低浓度到高浓度依次进样，测定相应的峰面积， 值比值为纵坐标，分别绘制松香酸和脱氢松香酸的标准曲线.
松香酸、脱氢松香酸和脱氢松香酸-D：标准物质的多反应监测（MRM）色谱图见附录B. 5.6试样溶液的测定 5.6.1定性测定 在相同试验条件下，试样中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在土2.5%之 内，且试样中被测组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行 比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为试样中存在对应的待测物.
表3定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 >20~50 0z~0< 1 允许最大偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 5.6.2定量测定 线（5.5）得到测定液中松香酸和脱氢松香酸的浓度. 试样中的待测物响应值应在标准曲线线性范围内. 若待测物含量超出标准曲线的测定范围，应重新处理试样，适量减少称样量，使其上机浓度在线性范围 内再进行定量. 5.7空白试验 除不加试样外，均按试样同法操作. 6结果计算 试样中松香酸和脱氢松香酸的含量按式（1)计算： ×V;× 1 000 * ( 1 ) 式中： X 试样中松香酸或脱氢松香酸的含量，单位为微克每千克（μg/kg）； P 一由标准曲线得到的试样溶液中松香酸或脱氢松香酸的质量浓度，单位为纳克每毫升 (ng/mL) ; V 试样提取液体积，单位为毫升（mL）； V 试样溶液最终定容体积，单位为毫升（mL）； 1000换算系数； m 试样的取样质量，单位为克（g）； V. 一用于净化的分取体积，单位为毫升（mL）. 计算结果保留3位有效数字.
