BJS 食品补充检验方法 BJS 202406 调味品和肉制品中 新品红、曙红和猩红的测定 2024-12-22发布 国家市场监督管理总局 发布
BJS 202406 调味品和肉制品中 新品红、曙红和猩红的测定 1范围 本方法规定了调味品和肉制品中新品红、曙红和猩红的液相色谱-申联质谱测定方法.
本方法适用于干辣椒及辣椒粉、辣椒油、辣椒酱、肉制品中新品红、曙红和猩红的测定.
2原理 试样经有机溶剂提取、离心后，固相萃取柱净化，用液相色谱-串联质谱仅测定，外标法定量.
3试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂 3.1.1甲醇（CHOH）：色谱纯.
3.1.2N，N-二甲基甲酰胺（CHNO）：色谱纯 3.1.3乙晴（CHCN）：色谱纯.
3.1.4乙醇(CH;OH) 3.1.5甲醇（CHOH） 3.1.6乙晴（CH CN).
3.1.7乙酸铵（CHCOONH）：色谱纯.
3.2试剂配制 3.2.15mmol/L乙酸铵溶液：称取0.385g乙酸铵（3.1.7）用水溶解并稀释至1000mL，混匀，经 0.22pm微孔滤膜（3.5.1）过滤后备用.
3.2.2乙醇-甲醇溶液（11)：量取100mL乙醇（3.1.4）和100mL甲醇（3.1.5）混合均匀后备用.
3.3标准品 新品红、曙红和猩红标准品的中文名称、英文名称、CAS号、分子式、相对分子质量和结构式见附录 A，纯度均≥90%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品，使用时需折算纯度.
3.4标准溶液配制 3.4.1储备液 3.4.1.1新品红标准储备液（1mg/mL）：准确称取按其纯度折算为100%的新品红标准品（3.3）10mg （精确至0.01mg），用甲醇（3.1.1）溶解后，转移至10mL容量瓶中.用甲醇（3.1.1）定容，混匀，配制成质 量浓度为1mg/mL的标准储备液，0℃～4℃保存，有效期3个月.
BJS 202406 3.4.1.2曙红标准储备液（1mg/mL）：准确称取按其纯度折算为100%的曙红标准品（3.3）10mg（精确 至0.01mg），用N，N-二甲基甲酰胺（3.1.2）溶解后，转移至10mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）定容，混匀， 配制成质量浓度为1mg/mL的标准储备液，0℃～4℃保存，有效期3个月.
3.4.1.3红标准储备液（1mg/mL）：准确称取按其纯度折算为100%的猩红标准品（3.3）10mg（精确 至0.01mg），用N，N-二甲基甲酰胺（3.1.2）溶解后，转移至10mL容量瓶中，用甲醇（3.1.1）定容，混匀， 配制成质量浓度为1mg/mL的标准储备液，0℃～4℃保存，有效期3个月.
3.4.2混合标准中间溶液 准确移取新品红（3.4.1.1）、曙红（3.4.1.2）、猩红（3.4.1.3）的标准储备液各0.10mL，置于10mL容 量瓶中，用甲醇（3.1.1）定容，混匀，配制成质量浓度为10mg/L的混合标准中间溶液，0℃～4C保存， 有效期1个月.
3.4.3标准系列工作溶液 准确移取混合标准中间溶液（3.4.2)适量，用空白基质溶液稀释，配制成质量浓度分别为40.00pg/L、 100.0μg/L、200.0 μg/L 500.0 μg/L、1 000 μg/L 2 000μg/L 的标准系列工作溶液，临用现配.
注：根据仅器的灵敏度及试样中待测物的实际含量确定标准系列曲线浓度.
3.5材料 3.5.1微孔滤膜：0.22pm，水相混合纤维素酯（MCE）型.
3.5.2PRiMEHLB固相萃取柱（60mg/3mL）或其他等效柱.
3.5.3微孔滤膜：0.45μm，疏水聚四氟乙烯（PTFE）型.
4仅器和设备 4.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）.
4.2天平：感量分别为0.001g和0.01mg.
4.3高速离心机：转速≥12000r/min. 4.4氮气浓缩装置.
4.5涡旋混合器.
4.6粉碎机. 5分析步骤 5.1试样制备和保存 5.1.1干辣椒：取样约200g，经粉碎机均质，装入洁净容器中密封并标记，于常温存放.
5.1.2辣椒粉、辣椒油：取样约200g，充分混匀，装人洁净容器中密封并标记，于常温存放.
5.1.3辣椒酱：取样约200g，经粉碎机均质，装人洁净容器内密封并做好标识，于0℃～4℃下保存 备用.
5.1.4肉制品：取可食用部分约200g，经粉碎机均质，装人洁净容器内密封并做好标识，于一18℃以下 保存备用.
5.2样品前处理 5.2.1提取 5.2.1.1辣椒酱、肉制品：称取2.0g（精确至0.001g）试样，置于50mL聚丙烯离心管中，加人10mL乙 2
BJS 202406 醇（3.1.4），涡旋提取20min，12000r/min离心5min，取全部上清液于另一50mL聚丙烯离心管中，向 残渣中加人10mL甲醇（3.1.5），涡旋提取20min，12000r/min离心5min，合并2次上清液，涡旋混匀 后于12000r/min离心5min，将上清液转移至25mL容量瓶中，用乙醇-甲醇溶液（3.2.2）定容至刻度， 混匀，待净化.
0.001g）辣椒油试样置于50mL聚丙烯离心管中，加人8mL乙醇（3.1.4），涡旋提取20min.12000r/min 离心5min，取全部上清液至另一50mL聚丙烯离心管中，向残渣中加人8mL甲醇（3.1.5），涡旋提取 20 min，12000r/min离心5min-转移并合并全部上清液，涡旋混匀后于12000r/min离心5min，将 上清液转移至25mL容量瓶中，用乙醇-甲醇溶液（3.2.2）定容至刻度，混匀，待净化.
5.2.2净化 准确移取2.50mL提取液，以1mL/min~2mL/min的流速通过固相萃取柱（3.5.2），接收流出液， 再用10mL甲醇洗脱，抽干，收集全部流出液，45C氮吹至近干，残渣用1.00mL甲醇（3.1.1）溶解（干 分析.
5.3仪器参考条件 5.3.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a）色谱柱：C色谱柱（3.0mm×50mm.1.8μm），或性能相当者： b）流动相：A为5mmol/L乙酸铵溶液（3.2.1)，B为乙睛（3.1.3），梯度洗脱程序见表1； c）流速：0.4mL/min; d）柱温：40C； e）进样体积：2pL 表1梯度洗脱条件 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 0 0 95 5 0 5 95 5 10 0 20 80 12.0 20 80 12.1 95 5 15 0 95 5 5.3.2质谱参考条件 质谱参考条件如下： a）离子源：电喷雾离子源（ESI）； b）扫描方式：正离子模式扫描和负离子模式扫描； c）检测方式：多反应监测（MRM）；
BJS 202406 d）毛细管电压：4000V/-3500V； e）干燥气温度：300C； f）干燥气流速：8L/min； g）葡气温度：350℃： h） 葡气流速：11L/min； i）多反应监测质谱参数见表2. 表2各化合物多反应监测质谱参数 序号 化合物 扫捕方式 母离子（m/） 子离子（/=） 醇裂电压/V 碰撞能量/eV 新品红 正离子 330 2 223 1 * 195 45 1 300 2 41 负离子 642.7 518.8* 2 曙红 160 40 440 9 40 正离子 368 1 275 1* 17 3 痤红 219.1 75 41 定量离子.
注：当采用不同质谱仅器时仅器参数可能存在差异，测定前将质谱参数优化到最佳.
5.4标准曲线的制作 将标准系列工作溶液（3.4.3）分别注人液相色谱-串联质谱仪中，测定相应的峰面积，以标准系列工 作溶液中各组分的浓度为横坐标，以峰面积的响应值为纵坐标，绘制标准曲线.
5.5试样溶液的测定 5.5.1定性确证 将标准系列工作溶液（3.4.3）和试样溶液（5.2.2）注人液相色谱-申联质谱仪中，记录标准系列工作 溶液和试样溶液中各化合物的保留时间，在相同条件下，试样溶液与标准系列工作溶液中待测组分的质 量色谱峰相对保留时间偏差在士2.5%以内，且其定性离子与浓度相当的标准系列工作溶液中相应的定 性离子相对丰度相比，偏差不超过表3规定的范围，则可判定试样中检出对应的待测组分.
标准溶液各 组分的典型图谱见附录B.
表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度/% >50 >20~50 >10~20 10 最大允许偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 5.5.2定量测定 将标准系列工作溶液（3.4.3）和试样溶液（5.2.2）注人液相色谱-串联质谱仪中，用标准曲线计算试 样溶液中各待测组分浓度，试样溶液中各待测组分的响应值应在标准曲线的线性范围之内，超出线性 范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释，同时用同等稀释倍数的空白基质溶液配制标准系列工作溶 液后重新进样测定.
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