BJS 食品补充检验方法 BJS202409 食品中托拉塞米等19种利尿剂的测定 2024-12-22发布 国家市场监督管理总局 发布
BJS 202409 食品中托拉塞米等19种利尿剂的测定 1范围 本方法规定了食品中托拉塞米、美托拉宗、依普利酮、托伐普坦、坎利酮、乙酰唑胺、精磺胺、氯噻嗪、 氢氯噻嗪、氯噻酮、甲氯噻嗪、依匹噻嗪、苄噻嗪、环噻嗪、泊利噻嗪、苄氟噻嗪、环戊噻嗪、呋塞米和丙磺 舒的高效液相色谱-申联质谱测定方法.
本方法适用于压片糖果、蜜饯、果冻、饮料、果蔬粉、饼干、代用茶、配制酒和发酵酒中托拉塞米、美托 拉宗、依普利酮、托伐普坦、坎利酮、乙酰唑胺、精磺胺、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氯噻酮、甲氯噻嗪、依匹噻嗪、 苄噻嗪、环噻嗪、泊利噻嗪、苄氟噻嗪、环戊噻嗪、呋塞米和丙磺舒的测定.
2原理 试样用50%甲醇溶液超声提取和离心后，10%甲醇溶液定容清液过膜后，经高效液相色谱-申联 质谱仪检测，外标法定量.
3试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为色谱纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂 3.1.1乙晴（CHN). 3.1.2甲醇（CHO）.
3.1.3甲酸（CHO）.
3.2试剂配制 3.2.150%甲醇溶液：量取125mL甲醇（3.1.2）.加水稀释至250mL，混匀备用.
3.2.210%甲醇溶液：量取10mL甲醇（3.1.2），加水稀释至100mL，混匀备用.
3.3标准品 托拉塞米、美托拉宗、依普利酮、托伐普坦、坎利酮、乙酰唑胺、精磺胺、氯噻嗪、氢氯噻嗪、氯噻酮、甲 氯噻嗪、依匹噻嗪、苄噻嗪、环噻嗪、泊利噻嗪、苄氟噻嗪、环戊噻嗪、呋塞米和丙磺舒标准品，纯 度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质.
19种标准品的中英文名称、CAS号、分子式 和相对分子质量见附录A. 3.4标准溶液配制 3.4.1标准储备液（500mg/L）：分别准确称取各标准品12.5mg（精确至0.1mg），加乙晴（3.1.1）溶解， 然后分别转移至25mL容量瓶中，用乙定容至刻度，配制成质量浓度均为500mg/L标准储备液.
-18℃及以下避光保存，有效期6个月.
BJS 202409 3.4.2混合标准中间溶液（2.0mg/L)：分别准确移取各标准储备液（3.4.1)0.10mL于25mL容量瓶 中，用50%甲醇溶液（3.2.1）稀释并定容，配制成质量浓度均为2.0mg/L混合标准中间溶液.
于0℃C~ 8C避光保存，有效期为1个月.
3.4.3混合标准中间溶液（0.2mg/L)：准确移取混合标准中间溶液（2.0mg/L)（3.4.2)1.0mL于10mL容 量瓶中，用50%甲醇溶液（3.2.1)稀释并定容，配制成质量浓度均为0.2mg/L混合标准中间溶液.
现用 现配.
3.4.4标准系列工作溶液：分别移取5.0pL、10.0μL.25.0pL混合标准中间溶液（0.2mg/L）（3.4.3）和 5.0pL、10.0μL、25.0μL混合标准中间溶液（2.0mg/L)（3.4.2），用空白基质提取液（5.2.3）分别稀释至 1 mL 配制成质量浓度为 1.00 ng/mL 2.00 ng/mL 、5.00 ng/mL 10.0 ng/mL 20.0 ng/mL 和 50.0 ng/ mL的系列标准工作溶液，现用现配.
或根据需要采用10%甲醇溶液（3.2.2）配制适当浓度的溶剂标准 工作溶液.
标准曲线系列工作溶液浓度或依据实际需要适当调整.
3.5材料 3.5.1微孔滤膜：0.22pm，聚四氟乙烯滤膜.
4仪器和设备 4.1高效液相色谱-串联质谱仪，配电喷雾离子源（ESI）.
4.2分析天平：感量分别为0.1mg和1mg. 4.3超声波清洗仪：工作颜率不低于40kHz. 4.4恒温水浴锅：水浴温度不低于80℃.
4.5离心机：转速不低于4000r/min. 4.6涡旋混合器.
5分析步骤 5.1试样制备和保存 取300g试样或试样（试样低于300g时）充分搅碎、均质或粉碎混匀，密饯样品剪碎至2mm 以下，果冻样品充分搅碎至浆状，含二氧化碳的液体样品通过加热或超声去除二氧化碳.
制备好的试样 于冰箱冷藏保存.
5.2样品前处理 5.2.1压片糖果、饮料、果蔬粉、饼干、代用茶、蜜饯、配制酒和发酵酒 准确称取1.0g（精确至0.001g）样品于25mL具塞刻度离心管中，加人20mL50%甲醇溶液（3.2.1）， 超声提取10min（超声过程中摇匀2次~3次），冷却至室温，4000r/min离心5min，转移上清液至 谱-申联质谱仪测定.
5.2.2果冻 准确称取1.0g（精确至0.001g）样品于25mL具塞刻度离心管中，加人10mL水，80C水浴至样 品溶解（水浴过程中注意摇散），冷却至室温，加人10mL甲醇（3.1.2），超声提取10min（超声过程中摇 匀2次~3次），冷却至室温，4000r/min离心5min，转移上清液至50mL容量瓶中，用10%甲醇溶液 2
BJS 202409 （3.2.2）稀释至刻度并摇匀，用微孔滤膜（3.5.1）过滤，待高效液相色谱-串联质谱仅测定.
5.2.3空白基质提取液 选取阴性基质样品，按照5.2.1或5.2.2操作步骤进行基质提取液的制备.
阴性基质样品中各目标物含量应在方法检出限以下.
5.3仪器参考条件 5.3.1色谱参考条件如下： a）色谱柱：Ci柱，2.7μm，150mm×2.1mm（内径），或性能相当者； b）流动相：A为甲酸水溶液（pH5）（3.2.3），B为乙晴溶液（3.1.1），参考梯度洗脱程序见表1； c）流速：0.3mL/min; d）柱温：30℃； e）进样量：5μL. 表1梯度洗脱程序表 时间/min 流动相A/% 施动相B/% 0 0 90 10 1 0 90 10 5 5 30 70 7 5 30 70 7 6 90 10 10 0 90 10 5.3.2质谱参考条件如下： a）离子源：电喷雾离子源（ESI源）； b）检测方式：多反应监测（MRM）； c）扫描方式：正离子模式和负离子模式： d）气帘气（CUR）、雾化气（GS1）、辅助气（GS2）、碰撞气（CAD）均为氮气或其他合适气体，使用前 应调节相应参数使质谱灵敏度达到检测要求，喷雾电压（IS）、去电压（DP）、碰撞能量（CE）等 参数使用前应优化至最佳灵敏度，定量离子对和定性离子对等信息见附录B.
5.4定性测定 按照高效液相色谱-串联质谱条件（5.3）在相同的试验条件下测定试样溶液和标准工作溶液，记录 色谱峰保留时间与标准溶液的保留时间相对偏差不大于2.5%，且定量离子与定性离子的相对离子丰度 与浓度相当标准溶液中相对离子丰度（k）偏差不超过表2规定的范围，则可确定试样中检出相应化 合物.
表2相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度（k）/% k>50 20<50 10<≤;20 10 最大允许偏差/% ±20 ±25 ±30 ±50 3 BJS 202409 5.5定量测定 5.5.1标准曲线的制作 将标准系列工作溶液（3.4.4）分别按仪器参考条件（5.3）进行测定. 以标准系列工作溶液中各化合 物的质量浓度为横坐标，以对应化合物色谱峰的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到线性回归方程. 标准溶液的色谱图见附录C. 5.5.2试样溶液的测定 将试样溶液（5.2）按仪器参考条件（5.3）进行测定，得到相应的样品溶液的色谱峰面积. 根据标准 曲线得到待测物的浓度. 试样溶液中待测物的响应值均应在标准曲线的线性范围之内，超出线性范围 时应根据测定浓度进行适当倍数稀释，同时用同等稀释倍数的空白基质配制标准曲线后再测定. 注：对于基质相对简单的压片糖果、发酵酒和配制酒基质采用溶别标准工作溶液绘制标准曲线. 5.6空白试验 除不加试样外，均按5.2步骤操作. 6结果计算 试样中各待测组分的含量按式(1)计算： x=）xV×1000 m × 1 000 × 1 000 式中： X 试样中各待测组分的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； P 由标准曲线得到的试样溶液中各待测组分的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； P 由标准曲线得到空白溶液中各待测组分的质量浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）： 定容的体积，单位为毫升（mL）； 1000换算系数： 9 试样称取的质量，单位为克（g）； f 稀释倍数 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，计算结果保留3位有效数字. 7精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不应超过算术平均值的10%. 8其他 当取样量为1.0g，定容至50mL时，托拉塞米、美托拉宗、依善利酮、托伐普坦、坎利酮、乙酰唑胺、 均为0.030mg/kg，定量限均为0.10mg/kg：氯噻嗪、氢氯噻嗪和呋塞米检出限均为0.025mg/kg，定量 限均为 0.050 mg/kg.
