BJS 食品补充检验方法 BJS 202413 食品中大麻酚、大麻二酚、 四氢大麻酚的测定 2024-12-22发布 国家市场监督管理总局 发布
BJS 202413 食品中大麻酚、大麻二酚、 四氢大麻酚的测定 1范围 本方法描述了食品中大麻酚、大麻二酚、四氢大麻酚的液相色谱-申联质谱测定方法.
本方法适用于食用植物油、糖果制品、巧克力、糕点、饼干、饮料、冷冻饮品中大麻酚、大麻二酚、四氢 大麻酚的测定.
2原理 试样中添加同位素内标，用乙晴提取，经固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪检测，多反应离子 监测，以保留时间和定性离子的丰度比定性，以内标法定量.
3试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水.
3.1试剂 3.1.1甲醇（CHO）：色谱纯.
3.1.2乙晴（CHN)：色谱纯.
3.1.3乙酸铵（CHNO）：色谱纯.
3.1.4氯化钠（NaCl).
3.2试剂配制 3.2.1乙酸铵溶液（5mmol/L)：称取0.385g乙酸铵（3.1.3)，用水溶解并稀释至1000mL.
3.2.25%甲醇溶液：量取5mL甲醇（3.1.1)，加水稀释至100mL.
3.3标准品 3.3.1大麻酚（CHO，CAS号：521-35-7）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准 品，相关信息见附录A.
3.3.2大麻二酚（CHO，CAS号：13956-29-1）：纯度>98%，或经国家认证并授予标准物质证书的 标准品.
3.3.3四氢大麻酚（CHO，CAS号：1972-08-3）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的 标准品.
3.3.4大麻酚-D（CHDO，CAS号：1435934-54-5）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证 书的标准品.
3.3.5大麻二酚-D （CHD O，CAS号：1435783-16-6）：纯度98%，或经国家认证并授予标准物质 证书的标准品.
BJS 202413 3.3.6四氢大麻酚-D（CHDO，CAS号：81586-39-2）：纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质 证书的标准品.
3.4标准溶液配制 3.4.1标准储备液 分别称取大麻酚、大麻二酚、四氢大麻酚标准品（3.3）各约10mg（精确至0.0001g），用乙晴（3.1.2） 溶解，转移至不同的10mL棕色容量瓶中，用乙腾（3.1.2）分别定容至刻度，摇匀，配制成质量浓度为 1000gg/mL的标准储备液，并转移至深色容器中，于-18C及以下密封避光保存，有效期12个月.
3.4.2内标储备液 分别称取大麻酚-D、大麻二酚-D、四氢大麻酚-D标准品（3.3）5mg（精确至0.0001g），用乙晴 （3.1.2）溶解，转移至不同的10mL棕色容量瓶中，用乙晴（3.1.2）分别定容至刻度，摇匀，配制成质量浓 度为500μg/mL的内标储备液，并转移至深色容器中，于一18℃C及以下密封避光保存，有效期12个月.
3.4.3混合标准中间液 分别准确移取标准储备液（3.4.1）1mL，置于同一100mL棕色容量瓶中，用乙晴（3.1.2）定容至刻 度，摇匀，配制成质量浓度为10μg/mL的混合标准中间液，并转移至深色容器中，于一18C及以下密 封避光保存，有效期12个月.
3.4.4混合内标中间液 分别准确移取内标储备液（3.4.2）1mL，置于同一50mL棕色容量瓶中，用乙晴（3.1.2）定容至刻 度，摇匀，配制成质量浓度为10μg/mL的混合内标中间液，并转移至深色容器中，于一18℃及以下密 封避光保存，有效期12个月.
3.4.5工作溶液 3.4.5.1混合标准工作液A：准确移取混合标准中间液（3.4.3）1mL，置于5mL棕色容量瓶中，用乙 （3.1.2）定容至刻度，摇匀，配制成质量浓度为2pg/mL的混合标准工作液A，并转移至深色容器中，于 一18及以下密封避光保存，有效期1个月.
3.4.5.2混合标准工作液B：准确移取混合标准工作液A（3.4.5.1）1mL，置于20mL棕色容量瓶中，用 乙（3.1.2）定容至刻度，摇匀，配制成质量浓度为0.1μg/mL的混合标准工作液B.
现用现配.
3.4.5.3混合内标工作液（1μg/mL）：准确移取混合内标中间液（3.4.4）1mL，置于10mL棕色容量瓶 中，用乙晴（3.1.2）定容至刻度，摇匀，配制成质量浓度为1μg/mL的混合内标工作液，并转移至深色容 器中，于一18℃及以下密封避光保存，有效期1个月.
3.4.6系列标准工作溶液 分别精密移取混合标准工作液B（3.4.5.2）50pL、100gL，混合标准工作液A（3.4.5.1)25pL、 50gL.100pL，混合内标工作液（3.4.5.3）20gL，置于一组1mL的棕色容量瓶中，分别用甲醇定容至刻 度，摇匀，制得质量浓度依次为5ng/mL、10ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL且内标浓度均 为20ng/mL的系列标准工作溶液，或依需要配制适当浓度的混合标准系列工作溶液.
现用现配.
3.5材料 3.5.1基质增强脂肪去除固相萃取柱（300mg/3mL）或其他等效柱.
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BJS 202413 3.5.2官能化聚苯乙烯/二乙烯苯固相萃取柱（200mg/6mL）或其他等效柱.
3.5.3聚四氟乙烯滤膜：0.22cm. 4仪器和设备 4.1液相色谱-申联质谱仪：配电喷雾离子源.
4.2天平：感量分别为0.01g和0.00001g.
4.3涡旋混合器：转速应不低于1500r/min.
4.4冷冻离心机：转速应不低于10000r/min，可0℃~4C控温.
4.5固相萃取装置.
4.6氮吹仪.
4.7匀浆机.
4.8组织接碎机.
4.9超声仪;≥40kHz. 5分析步骤 5.1试样制备和保存 5.1.1液体试样和粉状固体试样（食用植物油、液体饮料、固体饮料等） 取多个包装试样，充分摇匀（含二氧化碳的试样，超声除去气泡后摇匀），并在一个容器中搅拌均匀， 装人洁净容器中密封并标记，于0C～4C避光保存.
5.1.2糖果试样 取多个包装试样，于一18℃以下冷冻过夜，取出后立即用组织热碎机捣碎，搅拌均匀（胶基糖果样 品需剪小块后置于组织捣碎机接碎均匀），装入洁净容器中密封并标记，于0℃～4C避光保存.
5.1.3巧克力试样 取多个包装的试样，50℃～60C加热熔融后，用匀浆机趁热充分搅拌均匀，装人洁净容器中密封 并标记，于0℃~4C避光保存.
5.1.4其他半固体或固体试样 取多个包装试样，用组织捣碎机捣碎，搅拌均匀，装人洁净容器中密封并标记，于0℃～4℃避光 保存.
5.2样品前处理 5.2.1提取 5.2.1.1食用植物油 称取试样1g（精确至0.01g）于10mL聚丙烯离心管中，加人40pL混合内标工作液（3.4.5.3），再 加人5mL乙晴（3.1.2），涡旋混匀1min，常温条件下超声提取10min，于0℃～4℃条件下 10000r/min离心5min.上清液转移至另一10mL聚丙烯离心管中，残渣中再加人5mL乙晴（3.1.2） 重复提取一次，合并上清液，于40C下氮吹至近干，再加人乙晴（3.1.2）至2mL，摇匀，待净化.
BJS 202413 5.2.1.2其他试样 称取试样1g（精确至0.01g）于50mL聚丙烯离心管中，加人200uL混合内标工作液（3.4.5.3），加 入1g氯化钠（3.1.4），再加人5mL乙晴（3.1.2），涡旋混匀1min，超声提取10min，于0“C~4℃条件 下10000r/min离心5min上清液转移至另一个50mL聚丙烯离心管中，残渣中再加人5mL乙睛 （3.1.2），重复提取一次，合并上清液，加人10mL水，摇匀，一18℃及以下放置过夜（糖果、糕点、饼干、 饮料无需冷冻过夜），取出后于4C条件下10000r/min离心5min，取上清液待净化.
5.2.2净化 5.2.2.1食用植物油 将提取液（5.2.1.1>加载至固相萃取柱（3.5.1）上，收集流出液于接收管中，摇匀，过0.22um聚四氟 乙烯滤膜（3.5.3），供测定.
5.2.2.2其他试样 将提取液（5.2.1.2）加载至固相萃取柱（3.5.2）上[使用前依次用10mL甲醇（3.1.1）及10mL水活 化]，弃去流出液，用5%甲醇溶液（3.2.2）5mL淋洗，弃去淋洗液，吹干柱体，用10.0mL甲醇（3.1.1）洗 脱，收集洗脱液于接收管中，摇匀，过0.22pm聚四氟乙烯滤膜（3.5.3），供测定.
5.3仪器参考条件 5.3.1液相色谱参考条件 5.3.1.1色谱柱：苯基硅烷键合硅胶色谱柱（2.1mm×150mm.5gm），或性能相当者.
5.3.1.2柱温：30℃.
5.3.1.3进样量：5gL. 5.3.1.4流速：0.4mL/min. 5.3.1.5流动相：A为5mmol/L乙酸铵溶液（3.2.1），B为甲醇（3.1.1)，梯度洗脱条件见表1.
表1液相色谱梯度洗脱条件 / 流动相A/% 流动相B/% 0 65 35 6 5 95 7.4 5 95 7.5 65 35 10 65 35 5.3.2质谱参考条件 5.3.2.1离子源：电喷雾离子源（ESI源） 5.3.2.2扫描方式：负离子扫描.
5.3.2.3监测方式：多反应监测（MRM）.
5.3.2.4雾化气（GS1）、气帘气（CUR）辅助气（GS2）、碰撞气（CAD）均为高纯氮气或其他合适气体，使 用前应调节至质谱灵敏度达到检测要求，参考条件详见附录B.
5.3.2.5电喷雾电压（IS）、离子源温度（TEM）、碰撞能量（CE）、去簇电压（DP）等参数应优化至最佳灵 4
