ICS 65. 140 B 47 GH 中华人民共和国供销合作行业标准 GH/T1280-2019 蜂胶中咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松 素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素 和高良姜素含量的测定 反相高效液相色谱法 Determination ofcafferic acid p-coumaric acid ferulic acid pinobanksin pinocembrin 3-O-acetylpinobanksin chrysin and galangin in propolis Reversed-phase high performance liquid chromatographymethod 准信息服务平台 2019-11-28发布 2020-03-01实施 中华全国供销合作总社 发布
GH/T 12802019 前言 本标准按照GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的编写规则.
本标准由中华全国供销合作总社提出.
本标准由全国蜂产品标准化工作组归口.
本标准起草单位：浙江大学、杭州蜂之语蜂业股份有限公司、杭州天厨蜜源保健品有限公司、缙云县 绿纯养蜂专业合作社.
本标准主要起草人：胡福良、张翠平、周萍、王磊、胡元强.
GH/T 12802019 蜂胶中咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、 短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素含量的测定 反相高效液相色谱法 1范围 本标准规定了蜂胶中咖啡酸、p香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素 和高良姜素的反相高效液相色谱检测方法.
本标准适用于蜂胶及蜂胶乙醇提取物中咖啡酸、p香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素 3-乙酸酯、白杨素和高良姜素的测定.
本标准液相色谱的检出限：咖啡酸、p-香豆酸、阿巍酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、 白杨素和高良姜素分别为0.41、0.39、1.20、0.29、1.11、1.49、0.86、0.91μg/mL.
本标准液相色谱的定量限：咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、 白杨素和高良姜素分别为1.35、2.16、4.00、0.98、3.69、4.97、2.88、3.03ug/mL.
2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.
凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件.
凡 是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 唯信息服务平台 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准.
3.1 蜂胶propolis 工蜂采集树脂等植物分泌物与其上颚腺、蜡腺分泌物等混合形成的胶粘性物质.
4原理
GH/T 12802019 试样经乙醇提取，浓缩，再溶解于甲醇，用反相高效液相色谱仪紫外检测器在280mm处检测，外 标法定量.
5试剂与材料 实验室用水应符合GB/T6682规定的一级水.
除非另有规定，试剂均为分析纯.
5.1甲醇：色谱纯.
5.2乙醇.
5.3乙酸，色谱纯.
5.4流动相：甲醇（5.1）和1%乙酸（5.3）梯度洗脱.
5.5咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素标准品： 纯度≥98% 5.6咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素标准储备 液：准确称取适量的每种标准物质（5.5），用甲醇溶液（5.1）配成1.0mg/mL的标准储备溶液， 于4℃冰箱保存，可保存6个月.
5.7咖啡酸、p-香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素标准工作 液：吸取适量1.0mg/mL的标准贮备液（5.6），用甲醇溶液（5.1）分别稀释成适当浓度的标准工 作溶液，现用现配.
5.8滤膜：0.45μm，有机系.
6仪器和设备 6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器.
标准信息服务平台 6.2粉碎机.
6.3旋转蒸发仪.
6.4超声波清洗器.
7试样准备与保存 7.1试样的准备 取代表性试样适量，冷冻，粉碎，混匀，作为备检试样.
7.2试样保存 将试样于0℃~4℃保存.
GH/T 12802019 8操作步骤 8.1蜂胶样品预处理 准确称取10.0g（精确到0.1g）蜂胶试样，用30mL95%乙醇超声提取，每次用时15min，共提取 3次，合并滤液，定容至100mL（V1）.
取10mL（V2）减压蒸干，用25mlL（V3）甲醇超声溶解并定容， 0.45um滤膜过滤，供测定.
8.2色谱条件 色谱柱：SepaxHP-C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒度5μm：或性能相当的色谱柱.
流动相流速：1.0mL/min.
梯度洗脱：洗脱程序参见附录A表A.1.
检测波长：280nm.
柱温：33℃.
进样量：5μL.
8.3测定 取5μL样品溶液（8.1）、标准工作溶液（5.7）分别进样分析，绘制标准曲线，外标法定量.
色谱图参见附录A图A.1.
9结果计算与表示 9.1结果计算 试样中咖啡酸、p香豆酸、阿魏酸、短叶松素、松属素、短叶松素3-乙酸酯、白杨素和高良姜素含 量（X）以毫克每克（mng/g）表示，按式（1）计算： X=x3y2 mxV1 (I) 式中： Cs一标准工作曲线上计算得到的样液中化合物的浓度、单位为毫克每毫升（mg/mL）： V一试样溶液定容体积，单位为毫升（mL）； V-从试样溶液中取出的待测体积（mL）： V一待测试样最终定容体积，单位为毫升（mL）； m一样品质量，单位为克（g）.
9.2结果表示 将符合重复性要求的两个独立测定值的算术平均值作为测定结果（mg/g），保留两位有效数字.
平行 试验相对偏差不得超过2.0%.