ICS67.050 CCS X04 GH 中华人民共和国供销合作行业标准 GH/T1386-2022 果蔬食品中叶黄素、玉米黄质、隐黄质和胡 萝卜素的测定 Determination of lutein zeaxanthin cryptoxanthin and carotene in food from fruits and vegetables 2022-11-24发布 2023-01-01实施 中华全国供销合作总社 发布
GH/T 1386-2022 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草.
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本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由中华全国供销合作总社提出.
本文件由全国果品标准化技术委员会贮藏加工分技术委员会（SAC/TC501/SC1）归口.
本文件起草单位：江苏省农业科学院、中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究所、兴化 市联富食品有限公司、江苏艾兰得营养品有限公司、谱尼测试集团江苏有限公司、国家蔬菜加工技术研 发专业分中心、江苏省脱水果蔬产业技术创新战略联盟、安徽省科学技术研究院、丹东市农业农村发展 服务中心、江苏实朴检测服务有限公司.
本文件主要起草人：李大婧、王松均、戴竹青、张锋伦、施祖灏、张钟元、张兴、刘庆峥、何伟伟、 肖亚冬、屠琦、张国栋、聂梅梅、姚正颖、张晓红、刘庆蝶、许舒雯、刘玉军、王晓东、马海霞.
GH/T 1386-2022 果蔬食品中叶黄素、玉米黄质、隐黄质和胡萝下素的测定 1范围 本文件规定了果蔬食品中叶黄素、玉米黄质、α-隐黄质、β-隐黄质、α-胡萝卜素和β-胡萝卜素的 高效液相色谱测定方法.
本文件适用于含类胡萝卜素的果蔬原料及加工制品.
2规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件.
3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理 试验样品经正已烷-乙醇-丙酮-甲苯复合液提取，氢氧化钾-甲醇溶液皂化，使叶黄素、玉米黄质、 α-隐黄质、β-隐黄质、a-胡萝卜素和β-胡萝卜素释放为游离态，用正已烷萃取并减压浓缩后，进行高 效液相色谱法测定，外标法定量.
5试剂材料和仪器设备 5.1试剂 5.1.1甲基叔丁基醚[CH OC（CH)，MTBE]：色谱纯.
5.1.2甲醇（CH0）：色谱纯.
5.1.3二氯甲烷（CHC1）：色谱纯.
5.1.4正已烷（CH）：色谱纯.
5.1.5双蒸水（H.0）一级水.
5.1.6无水乙醇（CH0）：分析纯.
5.1.7丙酮（CH0）：分析纯.
5.1.85.1.8甲苯（CH）：分析纯.
5.1.9无水硫酸钠（NaS0）：分析纯.
5.1.10氢氧化钾（K0H）：分析纯.
5.1.11抗坏血酸（CHO）：分析纯.
5.1.122 6-二叔丁基-4-甲基苯酚（CH0 BHT）：分折纯.
5.2标准品 5.2.1叶黄素（CH0.）：纯度大于等于95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质或标准样 5.2.2玉米黄质（CH0）：纯度大于等于95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质或标准 样品.
5.2.3α-隐黄质（CH0）：纯度大于等于95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质或标准 样品.
5.2.4B-隐黄质（C_H0）：纯度大于等于95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质或标准 样品.
5.2.5α-胡萝下素（CH）：纯度大于等于95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质或标 1
GH/T 1386-2022 准样品.
5.2.6β-胡萝卜素（CH）：纯度大于等于95%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质或标 准样品.
5.3仪器和设备 5.3.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器/二极管阵列检测器.
5.3.2分析天平：感量0.001g和感量0.00001g.
5.3.3超声波清洗器.
5.3.4旋转蒸发仪.
5.3.5氮吹仪.
5.3.6涡旋仪.
5.3.7分光光度计.
5.3.8恒温培养箱.
5.4材料 微孔滤膜：0.45um，有机系.
6分析步骤 6.1通用要求 分析操作均应室内避光进行.
6.2试样制备 6.2.1原料试样 水果、蔬菜原料类样品经研磨、打浆获得均质溶液，0C~4C条件下可保存1天.
6.2.2固体试样 果蔬干制品、果蔬提取物制成的压片糖果、胶囊、粉剂等固体试样经粉碎、研磨、过筛（孔径小于 0.5mm），获得固体粉末状试样，0C～4C条件下可保存1周.
6.2.3液体试样 果蔬汁等液体试样无需处理.
6.3试剂配制 质或a-胡萝卜素或B-胡萝卜素标准品5g（精确至0.01mg），加入25mgBHT，转移至10ml棕色容 量瓶中，用二氯甲烷稀释并定容至刻度，配制成质量浓度为500ug/ml标准储备溶液，置于-20C避光 保存，保存期3个月，标准储备溶液使用前应按附录A进行浓度校正.
6.3.1标准中间溶液（100μg/mlL）：准确移取上述标准储备落液（6.3.1）1.0mlL于5mL棕色容量 瓶中，用二氯甲烷定容至刻度，摇匀，配制成质量浓度为100μg/mL标准中间溶液，4C避光保存， 保存期1周.
标准中间溶液使用前应按附录A进行浓度校正.
6.3.2标准系列溶液：分别移取上述标准中间溶液（6.3.2）0.0ml、0.05ml、0.1ml、0.2ml、0.3 mL、0.4ml、1.0mL于10mlL棕色容量瓶中，用流动相稀释并定容配成浓度范围0.0ng/nL~10.0μg/mL 的标准系列溶液.
临用现配.
6.3.3正已烷-乙醇-丙酮-甲苯提取液：分别准确移取正已烷10.0ml、乙醇6.0ml、丙酮7.0ml、 甲苯7.0mL于棕色磨口瓶中，混合均匀获得体积比为10:6：7:7的正已烷-乙醇-丙酮-甲苯提取液.
6.3.4氢氧化钾-甲醇溶液：称取氢氧化钾40g于磨口瓶中，加入100mL甲醇溶液，搅拌均匀获得 40%的氢氧化钾-甲醇溶液.
6.4提取和皂化 2
GH/T 1386-2022 准确称取1g~5g（精确至0.001g）试样，加入1.0g抗坏血酸，置于100ml磨口锥形瓶中，加 入30mL正已烷-乙醇-丙酮-甲苯-提取液（6.3.4），盖上瓶塞，振荡提取3h~4h，避免沉降.
提取结 束加入2mL40%氢氧化钾-甲醇溶液（6.3.5），摇匀，置于避光处，25C下皂化16h得皂化液.
6.5萃取 将皂化液转入250mL分液漏斗，加入30mL正已烷，盖好瓶塞，室温下震荡1min：再加入38mL10% 硫酸钠溶液，震荡摇匀，静置分层，收集有机层溶液：将水相按上述方法进行第二次萃取，合并有机相 溶液.
有机相于旋转蒸发器上40C减压浓缩至1mlL~2mL，随后用氮气吹干.
准确加入6.0mL甲醇溶 液，充分溶解，经0.45μm有机系膜过滤后收集至进样瓶中，备用.
6.6色谱测定 6.6.1色谱条件 色谱条件如下： a）色谱柱为C反向色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5：或等效色谱柱： b) 流动相A相，水、甲基叔丁基醚、甲醇体积比为5：25：70：流动相B相，水、甲基叔丁 基醚、甲醇体积比为5：85：10： c）洗脱梯度按表1进行： d) 流速为0.6ml/min; e） 检测波长为450nm； f）柱温为25°℃； g）进样体积为20 uL.
表1洗脱梯度 流动相比例 时间/min A% B% 0 95 5 4.5 80 20 12.5 50 50 18.0 25 75 24.0 5 95 30.0 5 95 6.6.2标准曲线绘制 分别将叶黄素、玉米黄质、a-隐黄质、β-隐黄质、a-胡萝卜素、β-胡萝卜素标准系列溶液（6.3.3） 注入高效液相色谱仪中，得到峰面积，以峰面积为纵坐标，以标准系列溶液浓度为横坐标绘制标准曲线.
6.6.3试样测定 将待测液（6.5）注入高效液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线得到待测液中叶黄素、玉米 黄质、a-隐黄质、β-隐黄质、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素浓度.
以玉米汁为例的样品高效液相色谱图见 附录B.
7数据处理 试样中叶黄素、玉米黄质、a-隐黄质、β-隐黄质、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素的含量以质量分数计， 按式（1）计算.
计算结果以重复性条件下获得的三次独立测定结果的算术平均值表示，保留三位有效 数字.
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