ICS67.180.10 CCS X31 GH 中华人民共和国供销合作行业标准 GH/T1395-2022 蜂蜜中苦参碱和氧化苦参碱含量的测定液 相色谱-串联质谱法 Determination of matrine and oxymatrine in Honey- Liquid chromatography-tandemmass spectrometry method 2023-02-09发布 2023-03-01实施 中华全国供销合作总社 发布
GH/T 1395-2022 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草.
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本文件由中华全国供销合作总社提出.
本文件由全国蜂产品标准化工作组（SAC/SWG2）归口.
本文件起草单位：秦皇岛海关技术中心、安徽泓顺源生物科技有限公司、中国蜂产品协会.
本文件主要起草人：崔宗岩、刘晓茂、纪欣欣、黄学者、贾光群、王治颖、祖铁红、汪昌宏、姜晓 林、谭丽蕊、张进杰、曹彦忠.
GH/T 1395-2022 蜂蜜中苦参碱和氧化苦参碱含量的测定液相色谱-串联质谱法 1范围 本文件规定了蜂蜜中苦参碱和氧化苦参碱含量测定的液相色谱-串联质谱法.
本文件适用于蜂蜜中苦参碱和氧化苦参碱含量的测定.
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理 试样用磷酸-甲酸铵缓冲溶液溶解提取，经阳离子固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱仪测定，外 标法定量.
5试剂和材料 除另有规定外，试剂均为分析纯，水为符合GB/T6682规定的一级水.
标准信息 5.1试剂 5.1.1甲酸（CHO2）：色谱纯.
5.1.2甲醇（CHOH）：色谱纯.
5.1.3氨水（NHHO）.
5.1.4磷酸（HPO）：纯度≥85%.
5.1.5甲酸铵（NHHCO）：纯度≥99% 5.2溶液配制 5.2.1磷酸-甲酸铵缓冲溶液：取20mL磷酸（5.1.4），6.3g甲酸铵（5.1.5），用水稀释至1L，混匀.
其中磷酸浓度为2%（v/v），甲酸铵浓度为0.1mol/L.
5.2.25%氨水甲醇溶液：取5mL氨水（5.1.3），用甲醇（5.1.2）稀释至100mL，混匀.
5.2.325%甲醇水溶液：取25mL甲醇（5.1.2），用水稀释至100mL，混匀.
5.3标准品 5.3.1苦参碱（Matrine，CisHzNO，CAS号：519-02-8），纯度≥98%.
5.3.2氧化苦参碱（Oxymatrine，CisHNO2，CAS号：16837-52-8），纯度≥98%.
5.4标准溶液配制
GH/T 1395-2022 标准品10mg（精确至0.01mg），置于10mL容量瓶中，加入甲醇溶解、稀释并定容，混匀，配制成浓 度均为1mg/mL的苦参碱和氧化苦参碱标准储备液.
-18°C以下避光保存，有效期6个月.
5.4.2混合标准中间液（10μg/mL）：分别取苦参碱和氧化苦参碱标准储备液（5.4.1）各0.1mL，于10 mL容量瓶中，用25%甲醇水溶液（5.2.3）稀释并定容，混匀，配成浓度为10μg/mL混合标准中间液， 2-8C条件下避光保存，有效期1个月.
5.4.3混合标准工作液（1μg/mL）：准确量取混合标准中间液（5.4.2）1mL，于10mL容量瓶中，用 25%甲醇水溶液（5.2.3）稀释并定容，混匀，配成浓度为1μg/mL混合标准工作液，2-8°C条件下避光 保存，现用现配.
5.5材料 5.5.1强阳离子固相萃取柱（MCX）：60mg/3mL，或相当者.
5.5.2过滤膜：有机系，规格0.22um. 6仪器和设备 6.1液相色谱-串联质谱仪：配有电喷雾离子源.
6.2分析天平：感量0.01g和0.00001g.
6.3涡旋混合器.
6.4固相萃取装置.
6.5氮吹仪.
7试样制备与保存 7.1试样的制备 对无结晶的蜂蜜样品，将其搅拌均匀.
对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过60°C的水浴 中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，冷却至室温.
分出200g作为试样.
制备好的试样置于样品瓶 中，密封，并做上标记.
7.2试样的保存 业标准信 试样于常温下保存.
8测定步骤 8.1提取 称取2g蜂蜜试样（精确至0.01g）置于50mL离心管中，加入10mL磷酸-甲酸铵缓冲溶液（5.2.1）， 涡旋混匀，待净化.
8.2净化 强阳离子固相萃取柱（5.5.1）依次用甲醇3mL和水3mL活化，提取液经塞好脱脂棉的漏斗过滤 后过固相萃取柱，依次用3mL水和3mL甲醇淋洗，抽干，用5mL5%氨水甲醇溶液（5.2.2）洗脱.
收集洗脱液，45°C氮气吹干.
加入25%甲醇水溶液（5.2.3）2mL，涡旋1min溶解残余物，微孔滤膜 过滤，液相色谱-串联质谱仪测定.
8.3基质匹配标准曲线的配制 精密量取适量混合标准工作液，分别加入7份经提取和净化的空白试样残渣中，45°C水浴下氮气 吹干，加入25%甲醇水溶液2.0mL，涡旋溶解残余物，配制成浓度为5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL、 3
GH/T 1395-2022 50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL的基质匹配系列混合标准溶液，微孔滤膜过滤，液相色谱串联质谱仪 测定.
8.4测定 8.4.1液相色谱参考条件 a)色谱柱：T3（2.1mm×150mm 3μm），或相当者： b)流动相：甲醇0.1%甲酸水溶液（梯度洗脱，见表1）； c)流速：0.2mL/min： d)柱温：40°℃； e)进样量：2L.
表1梯度洗脱条件（A：甲醇；B：0.1%甲酸水溶液） 时间（min） 流速（mL/min） A(%) B(%) 0.0 0.2 1 66 2.0 0.2 1 66 6.0 0.2 90 10 8.0 0.2 90 10 8.5 0.2 1 99 125 0.2 1 66 8.4.2质谱参考条件 a)离子源：电喷雾离子源（ESI）； b)扫描方式：正离子扫描； c)检测方式：多反应监测（MRM）； d)离子源温度：120°℃； e)脱溶剂温度：350°℃： f)脱溶剂气体流速：650L/h： 9）锥孔气流速：501/m： h）毛细管电压：3kV： i）苦参碱和氧化苦参碱的MRM参数见表2.
表2苦参碱和氧化苦参碱的多反应监测（MRM）参数 化合物名称 定性离子对 定量离子对 锥孔电压 碰撞能量 (m/z) (m/z) (V) (eV) 苦参碱 249.2/148.1 249.2/176.1 60 30 249.2/176.1 35 265.4/148.1 30 氧化苦参碱 265.4/205.3 265.4/205.3 60 265.4/247.4 28 8.5液相色谱-串联质谱测定 8.5.1定性确证 每种被测组分选择一个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，试样溶液中苦参碱、氧化苦 参碱的保留时间与基质匹配标准溶液中相应组分的保留时间一致，相对偏差在2.5%之内，离子对 4
