ICS67. 220 CCS X 04 T/BPMA 北京预防医学会团体标准 T/BPMA 29-2024 火锅底料中去甲乌药碱和曲托喹酚的测定 液相色谱-串联质谱法 Determination of higenamine and tretoquinol in hotpot seasoning Liquid chromatography-tandem mass spectrometry method 2024-07-30发布 2024-07-30实施 北京预防医学会 发布
T/BPMA29-2024 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起 草.
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本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由北京市科学技术研究院分析测试研究所（北京市理化分析测试中心）提出.
本文件由北京预防医学会归口.
本文件起草单位：北京市科学技术研究院分析测试研究所（北京市理化分析测试中心）、北京市疾 病预防控制中心、北京市延庆区疾病预防控制中心.
本文件主要起草人：王建风、冯月超、刘艳、郭巧珍、姚凯、张晶、林强.
T/BPMA 29-2024 火锅底料中去甲乌药碱和曲托喹酚的测定 液相色谱-串联质谱法 1范围 本文件描述了火锅底料中去甲乌药碱和曲托喹酚液相色谱-串联质谱的测定方法.
本文件适用于火锅底料中去甲乌药碱和曲托喹酚的定性定量测定.
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.
其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义.
4方法原理 火锅底料中的去甲乌药碱和曲托喹酚，用含5%甲酸的乙醇溶液提取，经十八烷基键合硅（Cis）、 石墨化碳黑（GCB）以及加强基质脂类去除剂（EMR）组合填料净化后，采用液相色谱-串联质谱法测 定，同位素内标法定量.
5试剂和材料 5.1试剂 除另有说明外，所用试剂均为色谱纯，水为GB/T6682规定的一级水.
5.1.1甲醇（CH；OH）.
5.1.2乙醇（CHsOH）.
5.1.3甲酸（CHCOOH）：纯度≥88%.
5.1.4甲酸铵（HCOONH4）.
5.1.5乙晴（CHCN）.
5.1.6去甲乌药碱（C1sHuNOs，CAS号：5843-65-2）：纯度大于等于99%.
5.1.7去甲乌药碱-Da（CisHsDaNOs，CAS号：-83-1）：纯度大于等于99%.
5.1.8曲托喹酚盐酸盐（C1HCINOs，CAS号：18559-59-6）：纯度大于等于99%.
5.1.9曲托唑酚盐酸盐-Dg（CisHisDsCINOs，CAS号：18559-63-2）：纯度大于等于99%.
5.1.10含5%甲酸的乙醇溶液：移取12.5mL甲酸（5.1.3），用乙醇（5.1.2）定容至250mL，混匀.
5.1.1110mmol/L甲酸铵水溶液（含0.1%甲酸）：称取0.315g甲酸铵（5.1.4），用水溶解，向其中加 入0.5mL甲酸（5.1.3），定容至500mL，混匀.
T/BPMA 29-2024 5.1.12复溶溶液：移取甲醇（5.1.1）和10mmol/L甲酸铵水溶液（含0.1%甲酸）（5.1.11）各50.0mL， 混匀.
5.1.13标准储备溶液：分别准确称取适量标准物质去甲乌药碱（5.1.6）、去甲乌药碱-D（5.1.7）、曲托 喹酚盐酸盐（5.1.8）、曲托喹酚盐酸盐-D（5.1.9），用甲醇溶解并定容于10mL容量瓶，按其纯度及有 效成分折算，配制成1000ug/mL标准储备溶液，-18C或以下避光保存，有效期3个月.
5.1.14混合标准储备溶液：分别准确移取去甲乌药碱和曲托喹酚两种标准储备液各100μL于10mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，配制成10ug/mL的混合标准储备溶液，有效期1个月.
5.1.15混合标准中间溶液：准确移取混合标准储备液（5.1.14）100uL于10mL容量瓶中，用甲醇定 容至刻度，配制成100ng/mL的混合标准中间溶液，现用现配.
5.1.16混合内标标准储备溶液：准确移取去甲乌药碱-D4和曲托喹酚-Dg标准储备液各100uL于10mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到10ug/mL混合内标标准储备溶液，有效期1个月.
5.1.17混合内标标准工作溶液：准确移取10μg/mL混合内标标准储备溶液（5.1.16）1.0mL于10mL 容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到1μg/mL混合内标标准工作溶液，现用现配.
5.1.18系列标准工作溶液：取适量混合标准中间液（5.1.15）和混合内标标准工作液（5.1.17），用复溶 溶液（5.1.12）稀释配制成浓度为0.1ng/mL、0.5 ng/mL、1 ng/mL、5 ng/mL、10ng/mL的系列标准工 作溶液，其中内标浓度为5ng/mL，现用现配.
5.2材料 5. 2.1石墨化碳黑（GCB，120 μm~400μm）.
5.2.2十八烷基键合硅胶（Cis，40μm~60μm）.
5.2.3加强基质脂类去除剂（EMR）.
5.2.4微孔滤膜：有机系，尼龙，0.22μm.
6仪器和设备 6.1液相色谱-三重四极杆串联质谱仪，配备有电喷雾电离源（ESI）.
6.2离心机：转速不低于8000r/min. 6.3氮气吹干仪.
6.4振荡器.
6.5涡旋混合器.
6.6超声波清洗器.
6.7分析天平：感量0.00001g和0.01g.
7试样制备和保存 7.1试样制备 取代表性样品500g，用搅碎机充分搅碎混匀（块状样品需先在60°C水浴中融化后再用搅碎机充分 2
T/BPMA 29-2024 搅碎混匀）均分成两份作为试样，并标明标记.
7.2试样保存 将试样于-18℃及以下保存.
8测定步骤 8.1样品的处理 8.1.1提取 称取试样2g（精确到0.01g）于50mL具塞螺旋盖聚丙烯离心管中，加入混合内标工作溶液（5.1.17） 100 μL，加入20mL含5%甲酸的乙醇溶液（5.1.10），涡旋混匀，振荡提取30min，8000r/min离心5min， 取上清液，待净化.
8.1.2净化 移取2.0mL8.1.1中的待净化上清液于10mL净化管中，加入65mg GCB（5.2.1）、65mgCns（5.2.2） 和65mgEMR（5.2.3），涡旋混合，8000r/min离心5min，移取1.0mL上清液，40C氮气吹至近干， 用复溶溶液（5.1.12）定容至1.0mL，涡旋混合30s，用微孔滤膜（5.2.4）过滤，供液相色谱-串联质谱 仪测定.
8.2空白试验 除不加试样外，其他步骤均按8.1进行.
8.3仪器分析条件 8.3.1液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a）色谱柱：高强度硅胶颗粒色谱柱（2.1mmx100mm 1.8μm）或性能相当者： b)柱温：30℃： c)进样量：5uL： d)流速：0.3mL/min: e)流动相：A相为乙腊（5.1.5），B相为10mmol/L甲酸铵水溶液（含0.1%甲酸）（5.1.11），梯 度洗脱条件见表1： f）被测物及内标物的参考保留时间见表2.
表1梯度洗脱条件 时间（min） A (%) B (%) 0.0 3 97 1.5 3 97 5.5 95 5 5.6 3 97 7.5 3 97
