ICS 11. 220 CCS B 41 团 体 标 准 T/CVMA200-2024 猫细小病毒实时荧光RAA检测方法 Real-time RAA method for detection of feline parvovirus 2024-12-4发布 2024-12-4实施 中国兽医协会 发布
T/CVMA200--2024 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.
本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由中国兽医协会提出并归口.
本文件起草单位：上海市动物疫病预防控制中心、武汉科前生物股份有限公司、陕西科技大学、上 海市嘉定区动物疫病预防控制中心、上海市青浦区农产品质量安全中心、上海市闵行区动物疫病预防控 制中心、上海市金山区动物疫病预防控制中心.
本文件主要起草人：桂亚萍、周登元、钱卫东、陈琦、赵洪进、王建、刘健、夏琦琦、冯桂丹、沈 莉萍、徐锋、张玉杰、夏炉明、卢军、朱晓英、范玉风、曹传闺、肖罐明、王曲直、孙清、郑华、翁永 刚.
T/CVMA 200-2024 猫细小病毒实时荧光RAA检测方法 1范围 本文件描述了猫细小病毒实时荧光RAA检测方法原理、实验材料和操作步骤.
本文件适用于猫细小病毒核酸检测.
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.
其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB19489实验室生物安全通用要求 GB/T27401实验室质量控制规范动物检疫 NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义.
4缩略语 下列缩略语适用于本文件.
Ct值：每个反应管内的荧光信号量达到设定的阔值所经历的循环数（Cyclethreshold） DNA：脱氧核糖核酸（Deoxyribonucleic acid） FPV：猫细小病毒（Feline parvovirus） PBS：磷酸盐缓冲盐水（Phosphate buffered saline） RAA：重组酶介导的核酸扩增（Rebinase-aided nucleic acid amplification） RNA：核糖核苷酸（Ribonucleic acid） 5原理 RAA是一种核酸恒温扩增技术，在恒温下（一般为37°℃~42°C），重组酶和寡核苷酸引物结合 形成蛋白-DNA复合物，该复合物能够移动寻找模板DNA中的同源序列，在单链DNA结合蛋白的帮 助下，打开模板DNA的双链结构，在DNA聚合酶的作用下，形成新的双链，产物呈指数级扩增.
在 exo 探针中包含一个四氢呋哺残基（THF），其两侧分别为dT-荧光基团（FAM）和dT-淬灭基团（BHQ-1）.
探针3'端通过适当的修饰（C3Spacer）被封闭，以阻止聚合酶的进一步延伸.
只有当探针和目的DNA 结合后，核酸外切酶III（Exonucleaselll，ExolII）能够识别并切除THF残基，并解除3'端阻断，荧光
