ICS 71.100.70 CCS C 268 T/NAIA 团体标准 T/ NA1A0320-2024 化妆品中芦丁等6种黄酮类化合物的测定 高效液相色谱法 Determination of Rutin and other flavonoid in cosmetics By High-performance liquid chromatography 2024-10-02发布 2024-10-20实施 宁夏化学分析测试协会发布
T/NA1A 前言 本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规 则》的规定起草.
本文件由宁夏回族自治区药品检验研究院提出.
本文件由宁夏化学分析测试协会归口.
本文件起草单位：宁夏回族自治区药品检验研究院（国家枸杞产品质量检验检测中心 （宁夏）、宁夏回族自治区药品质量控制与评价重点实验室、宁夏卫生健康职业技术学院、 宁夏工商职业技术学院.
本文件主要起草人：肖哲丽、王宁、王宁霞、马玲、尚博扬、翟宇、武亦融、王荣、 贺凯、刘永衡、马宗卫.
T/NA1A 化妆品中芦丁等6种黄酮类化合物的测定 高效液相色谱法 Determination of Rutin and other flavonoid in cosmetics By High-performance liquid chromatography 1范围 本文件规定了高效液相色谱法测定化妆品中芦丁等6种黄酮类化合物含量的测 定方法.
本文件适用于水剂类、乳液类、膏霜类、贴面面膜类化妆品中芦丁等6种黄酮类化合物 的定性与定量测定.
2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的.
凡是注日期的引用文件，仅注日期的 版本适用于本文件.
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适 用于本文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理 样品经80%甲醇水溶液超声提取后，采用高效液相色谱系统分离，二极管阵列检测 器（DAD），在波长360mm处检测，根据保留时间和紫外光谱定性，外标法定量.
5试剂与材料 除另有说明外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的一级水.
5.1甲醇：色谱纯.
5.2磷酸：HPO，色谱纯.
5.380%甲醇溶液：准确量取800mL甲醇于1L容量瓶中，用水定容至刻度，混匀后备用.
5.40.1%磷酸溶液：准确量取1.0mL磷酸于1L容量瓶中，用水定容至刻度，混匀后备用.
5.5标准品 芦丁（CAS号153-18-4）、杨梅酮（CAS号529-44-2）、异鼠李素-3-O-β-D-芸
T/NA1A 香糖苷（CAS号604-80-8）、皮素（CAS号117-39-5）、木草素（CAS号 491-90-3）、山奈酚（CAS号520-18-3）标准品：纯度≥91% 5.6标准品溶液配制 5.6.1标准储备溶液：分别精密称取芦丁、杨梅酮、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷，栅皮素、木 草素、山奈酚标准品各10mg（精确至0.0lmg），分别置于10mL容量瓶中，用适量甲醇 （5.1）溶解并定容至刻度，摇匀，配制成1000mg/L标准储备溶液，于4℃避光保存，可 使用三个月.
5.6.2混合标准储备溶液分别准确移取上述标准储备溶液（5.6.1）各2.5mL于50mL容量瓶 中，用甲醇定容至刻度，配制成浓度为50mg/L的混合标准储备溶液，临用现配.
5.6.3混合标准工作溶液：分别准确量取混合标准储备溶液（5.6.2）0.2mL、0.4mL、 1.0mL、2.0mL、5.0mL、10.0mL用甲醇稀释至10mL，得到浓度为1.0Hg/mL、 2.0Hg/mL、5.0Hg/mL、10.0Hg/mL、25.0Hg/mL、50ug/mL的混合标准工作溶液（混合 标准工作溶液范围可根据实际情况进行调整），临用现配.
标准溶液色谱图见附录 A.
6仪器与设备 6.1高效液相色谱仪：配有紫外检测器或二极管阵列检测器.
6.2分析天平：感量0.00001g.
6.3超声波清洗器.
6.4超纯水机.
6.5多管涡旋混合仪.
6.6微孔滤膜：0.45um，有机系.
7样品处理 准确称取化妆品试样0.5g（精确到0.0001g）于10mL具塞比色管中（若试样为贴面面膜 类样品应取液体部分），加入约6mL的80%甲醇溶液，涡旋震荡使试样与提取溶剂充分混 匀，超声提取20min，冷却至室温，加入80%甲醇溶液定容至10mL，经孔径为0.45Pm有 机微孔滤膜过滤后，滤液作为样品待测溶液.
8测定条件 8.1高效液相色谱参考条件如下： a）色谱柱：Cis柱（4.6mmmx250mm 5um），或等效色谱柱：
T/NA1A b)柱温：25C： c)流动相：A:0.1%磷酸（5.4），B:甲醇（5.1），见表1： d)检测波长：360nm: e)流速：0.8mL/min; f进样量：10uL.
表1梯度洗脱程序 时间（min） 流动相A（%） 流动相B（%） 0 51 49 01 51 49 13 30 70 20 70 23 51 49 28 51 49 8.2测定 在“8.1”项下色谱条件下，取“5.6.3”项下混合标准工作溶液分别进样，进行液 相色谱分析，以混合标准工作溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线.
取“样品处理”项下的待测溶液，进行色谱分析，根据相对保留时间和紫外光图谱 定性，外标法定量计算待测溶液中各组分的浓度.
按“9”计算样品中各组分的含量（试 样中各组分的响应值均应在标准曲线范围内，超过线性范围时应根据测定浓度进行适当 倍数稀释后再进行分析）.
9分析结果的表述 试样中芦丁、杨梅酮、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷，彬皮素、木草素、山奈酚6种 黄酮类化合物的含量按以下公式计算： =xVxD mx1000 (1) 式中：一一试样中芦丁等6种黄酮类化合物含量的数值，单位为毫克每克（mg/g）： P一一代入标准曲线测得试样中芦丁等6种黄酮类化合物的质量浓度，单位为 毫克每升（mg/L）： 一一试样的质量，单位为克（g）： 一试样中加入并定容的提取溶液体积的数值，单位为毫升（ml）： D-为稀释倍数：
