ICS07. 080 CCS C 27 团 体 标 准 T/SHQAP 018-2024 人真皮成纤维细胞 Human dermal fibroblast 2024-12-27发布 2025-01-27实施 上海市医药质量协会 发布
T/SHQAP 018-2024 目次 前 言 1范围.. 2规范性引用文件 3术语和定义. 4缩略语 5原材料和辅料. 6制备的一般要求 7技术要求.
8检验方法. 9检验规则. 10标签 11包装、储存及运输 12废弃物处理 附录 A （资料性）细胞存活率检测细胞计数法 附录 B （规范性）细胞标志蛋白检测流式细胞法 附录 C （规范性）细胞功能指标检测ELISA法 附录 （规范性）人成纤维细胞成瘤性检测裸鼠皮下接种法
T/SHQAP 018-2024 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草.
请注意本文件的某些内容可能涉及专利.
本文件的发布机构不承担识别专利的责任.
本文件由上海市医药质量协会提出.
本文件由上海市医药质量协会归口.
本文件起草单位：上海交通大学医学院附属第九人民医院、椎元医学技术（上海）有限公司、上海 赛立维生物科技有限公司、上海慧存医疗科技有限公司、和元和美（上海）生物技术有限公司.
本文件主要起草人：赵杰、秦安、陈辰、施磊、范明、那和新、周伸奥、张琴、周丽、刘洋、温孟 楠、杨昊、张桂诚、股永红、翁智辉、潘讴东、潘珺屹、股珊.
本文件首期承诺执行单位：上海交通大学医学院附属第九人民医院、椎元医学技术（上海）有限公 司、上海赛立维生物科技有限公司、上海慧存医疗科技有限公司、上海赛尔维医疗科技有限公司、和元 生物技术（上海）股份有限公司、和元和美（上海）生物技术有限公司、上海谱洛瑞生物医药有限公司、 上海弗闰德生物科技有限公司.
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T/SHQAP 018-2024 人真皮成纤维细胞 1范围 本文件规定了人真皮成纤维细胞的原材料和辅料、制备的一般要求、技术要求、检验方法、检验规 则、标签、包装、储存及运输和废弃物处理要求.
本文件适用于人真皮成纤维细胞的制备和检测.
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用面构成本文件必不可少的条款.
其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 文件.
中华人民共和国药典（2020年版） GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 2985显微镜 GB19815离心机安全要求 GB/T26497电子天平 YY/T0588流式细胞仪 JJF1665细胞技术仪校准规范 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件.
3. 1 人真皮成纤维细胞 人体皮肤组织的真皮层分离的细胞 生、创伤愈合.
3. 2 主细胞库 由细胞种子经培养至特定倍增水平或传代水平，并经一次制备获得并分装的同质和均一的悬液.
注：细胞种子是指已通过鉴定证明适用于生物制品生产或检测的，来源于人或动物的，由一个原始细胞群体发展成 传代稳定的细胞群体，或经过克隆培养以及基因工程构建的均一细胞群体.
3.3 工作细胞库 由主细胞库的细胞经培养至特定倍增水平或传代水平，并经一次制备获得并分装的同质和均一的悬 液.
4缩略语 下列缩略语适用于本文件.
A0/PI：吖啶橙（Acridine Orange）和碘化丙锭（Propidium Iodide） CD:分化籁（Cluster of Differentiation） COLIA1:I型胶原蛋白A1（Collagen Type IA1） EBV：疱疹病毒（Epstein-Barr Virus) ELISA：酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay） HBV：乙型肝炎病毒（Hepatitis BVirus） HCMV：人类巨细胞病毒（HumanCytomegalovirus）
T/SHQAP 018-2024 HIV：人类免疫缺陷病毒（HumanImmunodeficiency Virus） HLADR DP DQ： 人白细胞抗原DR DP DQ (Human Leukocyte Antigen-DR DP DQ) HTLV：人类T淋巴细胞病毒（Human T-lymphotropic virus） PBMCs：外周血单个核细胞（PeripheralBlood Mononuclear Ce11s） TGFβl：转化生长因子β1（Transforming Growth Factor Beta 1) TP:梅毒螺旋体（Treponema pallidum） HCY：丙型肝炎病毒（Hepatitis CVirus） Vimentin:中间丝蛋白ⅢI型（Intermediate Filament Protein Type III） 5原材料和辅料 5.1起始原材料的获取应符合伦理和法律法规，起始原材料供者应签署书面的合法有效的知情同意书， 并建立起始原材料数据库，保护供者隐私信息.
5.2应建立和执行供者评估及筛选方法，供者应至少筛查HIY、HBV、HCV、HTLV、EBV、HCMV、TP，检 测结果应均为阴性，应排除有遗传性疾病的供者，并应对供者进行一般情况筛查.
5.3应建立和执行细胞采集、运输、交接与储存方法.
5.4细胞培养过程中使用的培养基及其他添加物等应建立质量标准，并按照质量标准进行控制.
5.5不宜使用动物血清或其他动物源成分，如必须使用，应确认无特定动物源性病毒感染.
5.6细胞冻存时使用的辅料，应建立质量标准，并按照质量标准进行控制.
6制备的一般要求 6.1人真皮成纤维细胞培养所需的基础设施和环境条件，应符合生物安全的要求，满足产品质量控制 需要的洁净条件并避免微生物污染和交叉污染.
6.2制备方应对制备操作人员进行培训，建立考核标准，人员培训考核合格后进行制备操作.
6.3制备方宜建立人真皮成纤维细胞的主细胞库和工作细胞库.
6.4人真皮成纤维细胞应长期冻存于低于-130℃的环境下，并有相应的冻存记录，至少包含细胞名称， 培养代次，冻存密度，冻存体积，冻存时间等信息.
6.5人真皮成纤维细胞的制备应有标准操作规程，制备过程应符合标准操作规程的要求.
6.6人真皮成纤维细胞培养或使用时，应记录细胞名称，培养代次，细胞密度与细胞活率等信息.
6.7人真皮成纤维细胞培养或使用时，细胞代次不应超过20代.
7技术要求 人成纤维细胞应符合表1中技术要求.
表1人成纤维细胞技术要求 类别 项目 技术要求 细胞形态 细胞应呈梭形和/或星形，贴壁生长 鉴别 细胞标志蛋白” CD105、CD90、Vimentin、COLIA1阳性比例均应≥80% CD45、HLA-DR DP DQ阳性比例均应小于5% 活率 细胞存活率 未冻存时，人真皮成纤维细胞存活率宜≥80% 冻存复苏时，人真皮成纤维细胞存活率宜≥70% 细胞功能 细胞因子分泌水平（COLIA1） ≥0 ng/nl. 细胞因子分泌水平（TGFβ1） ≥0 ng/nl. 无菌检查 无菌生长 细菌内毒素 <3 EU/nl. 异常毒性检查 动物全部健存且无异常反应，体重有增加 安全性 支原体 阴性 成瘤性 免疫缺陷动物体内成瘤实验结果应为阴性 染色体核型 染色体核型应为46，XY或者46，XX.染色单体和染色体断裂≤26， 结构异常≤10，超二倍体≤5，亚二倍体≤90，多倍体≤17 2
