ICS 67.050 CCS X 04 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5597-2024 出口食品中四氢大麻酚、大麻二酚和 大麻酚的测定液相色谱-质谱/质谱法 Determination of tetrahydrocannabinol cannabidiol and cannabinol in food forexport-LC-MS/MSmethod 2024-12-31发布 2025-07-01实施 中华人民共和国海关总署发布
SN/T5597-2024 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草.
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本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口.
本文件起草单位：中华人民共和国福州海关、中华人民共和国拉萨海关、中华人民共和国杭州海关、 中华人民共和国长春海关、中国标准化研究院、福建工程学院、吉林紫鑫药业股份有限公司.
本文件主要起草人：唐庆强、杨方、叶洪、曹晓钢、王君、兰韬、曹丹、陈金凤、张勋、胡婷婷、封有顺、 齐安乔.
SN/T 5597-2024 出口食品中四氢大麻酚、大麻二酚和 大麻酚的测定液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本文件描述了食品中四氢大麻酚、大麻二酚和大麻酚的液相色谱-质谱/质谱测定方法.
本文件适用于火麻油、橄榄油、火麻仁、大豆、牛肉、面包、面粉、牛奶、蜂蜜、巧克力、啤酒和饮料中四 氢大麻酚、大麻二酚和大麻酚的测定和确证.
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.
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GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义.
4方法提要 样品经乙晴或甲醇提取后，用固相萃取小柱净化，经液相色谱分离，串联质谱检测，内标法定量.
5试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯.
水为GB/T6682规定的一级水.
5.1甲醇：色谱纯.
5.2乙腈：色谱纯.
5.3乙酸铵：色谱纯.
5.4氯化钠.
5.5三氯乙酸.
5.650%甲醇水溶液：量取50mL甲醇（5.1)，用水定容至100mL.
5.775%甲醇水溶液：量取75mL甲醇(5.1)，用水定容至100mL.
5.810mmol/L.乙酸铵水溶液：准确称取0.77g乙酸铵（5.3).加适量水溶解后，用水定容至1L.
5.9四氢大麻酚标准物质（△9-Tetrahydrocannabinol，△9-THC)：CHsO，CASNo.1972-08-3，含量 ≥0.1 mg/ml.
5.10大麻二酚标准物质（Cannabidiol CBD)：CHzsO，CASNo.13956-29-1，含量≥0.1mg/mL.
5.11大麻酚标准物质（Cannabinol CBN)：CHsoO，CASNo.521-35-7，含量≥0.1mg/mL.
SN/T 5597-2024 5.12同位素内标标准物质（△9-Tetrahydrocannabinol-d3，△9-THC-d3）：CHeDsO，CAS No.81586- 39-2 含量≥0.1mg/mL.
5.13混合标准储备液（10.0mg/L)：分别准确吸取适量3种大麻标准物质（5.9～5.11)于同一25mL 容量瓶中，用甲醇（5.1)定容至刻度.
此溶液于一20C避光条件下可储存6个月.
5.14内标储备液（10.0mg/L)：准确吸取适量同位素内标标准物质（5.12)于25mL容量瓶中，用甲醇 （5.1）定容至刻度.
此溶液于一20℃避光条件下可储存6个月.
5.15混合标准中间液（1.0mg/L)：准确移取10.0mL混合标准储备液（5.13)于100mL容量瓶中，用 甲醇（5.1)定容至刻度.
现用现配.
5.16内标中间液（1.0mg/L)：准确移取10.0mL内标储备液（5.14)于100mL容量瓶中，用甲醇(5.1) 定容至刻度.
现用现配.
5.17混合标准工作液：准确移取一定量的混合标准中间液（5.15)和内标中间液（5.16)，用75%甲醇水 溶液(5.7)配制成质量浓度为10.0μg/L、20.0pg/L、50.0μg/L、100.0μg/L和200.0pg/L（含50.0μg/L内 标）的混合标准工作曲线.
现用现配.
5.18CaptivaEMR-Lipid固相萃取柱：100mg，3mL 或相当者.
使用前用2mL乙晴活化，并保持柱 体湿润.
5.19二乙烯苯-N-乙烯基吡略烷酮（HLB)固相萃取柱：60mg，3mL，或相当者.
使用前依次用5mL 甲醇（5.1)、5mL水活化，并保持柱体湿润.
5.20滤膜：有机系，0.22μm.
6仪器和设备 6.1液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)仪：配有电喷雾离子源(ESI).
6.2天平：感量0.01g.
6.3组织捣碎机.
6.4超声恒温水浴仪.
6.5氮吹仪.
6.6高速离心机：转速≥10000r/min.
6.7涡旋振荡器.
6.8固相萃取装置.
7试样制备与保存 7.1试样制备 火麻仁、牛肉、大豆、面包等食品试样放入组织捣碎机中搅碎混匀，巧克力等糖果试样于一70℃C或 液氮中冷冻后放入组织捣碎机中均质.
样品充分混匀，均分成两份，分别装入清洁容器内，密封并做标 记；火麻油、面粉、橄榄油、牛奶、蜂密、饮料和啤酒等试样分别装入清洁容器内，含二氧化碳的饮料和酒 应先在超声波水浴中超声15min去除气体，密封并做标记.
7.2试样保存 制备后的试样均在一4℃下保存.
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SN/T5597-2024 8测定步骤 8.1提取 8.1.1火麻油、橄榄油试样 称取约2g试样（精确至0.01g)于50mL离心管中，加人100uL同位素内标中间液（5.16）和 10mL乙（5.2），混匀后用涡旋振荡器振荡30s，50C超声波提取15min，10000r/min下离心 5 min，必要时置于-18C冰箱中冷冻2h以进一步去除油脂.
准确移取5mL上层溶液，待净化.
8.1.2火麻仁、大豆、牛肉、面包、蜂蜜、巧克力、面粉等试样 称取2g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入100μL同位素内标中间液（5.16)和10mL 甲醇（5.1)，混匀后用涡旋振荡器振荡30s 50°C超声波提取15min，于10000r/min下离心5min，准 确移取5mL上层溶液于另一50mL离心管A中，并加人5mL水稀释后涡旋混匀30s，10000r/min 下离心5min.
移取全部上清液于另一50mL离心管B中，向离心管A残渣中加入1mL50%甲醇水 溶液（5.6)后涡旋混匀30s，10000r/min下离心5min，合并全部上清液于离心管B中，待净化.
8.1.3牛奶试样 称取2g试样（精确至0.01g)于50mL离心管中，加人100μL同位素内标中间液（5.16）、5g氯化 乙酸（5.5)，静置15min~20min沉淀蛋白质后，于10000r/min下离心5min，准确移取5mL上层溶 液于另一50mL离心管A中，并加入5mL水稀释后涡旋混匀30s，10000r/min下离心5min.
移取 全部上清液于另一50mL离心管B中，向离心管A残渣中加人1mL50%甲醇水溶液（5.6)后涡旋混 匀30s，10000r/min下离心5min，合并全部上清液于离心管B中，待净化.
8.1.4饮料、啤酒等液体试样 称取2g试样（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入100uL同位素内标中间液（5.16）、5g氯化 钠（5.4)和10mL甲醇（5.1)，混匀后用涡旋振荡器振荡30s 50C超声波提取15min，于10000r/min 下离心5min，准确移取5mL上层溶液，加入5mL水混匀后待净化.
8.2净化 8.2.1火麻油、橄榄油试样净化 将8.1.1中的待净化液转移至事先活化的EMR固相萃取柱（5.18）中，待其自然重力流出后，用 5mL乙晴（5.2)以1mL/min流速洗脱于10mL玻璃试管或合适容器中，减压抽干30s.
收集全部流 出液和洗脱液，于40C下用氮气吹干后，立即加入1mL75%甲醇水溶液（5.7），涡旋混合1min，经微 孔滤膜(5.20)后，供液相色谱-质谱/质谱测定.
8.2.2其他试样净化 将8.1.2～8.1.4中的待净化液转移至事先活化的HLB固相萃取柱（5.19)中，待其自然重力流出 后，用5mL50%甲醇水溶液（5.6)以1mL/min流速淋洗小柱，弃去全部淋洗液，并负压抽干小柱.
用 5 mL乙晴（5.2)以1mL/min流速洗脱于10mL玻璃试管或合适容器中.
洗脱液于40°C下用氮气吹 质谱测定.
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