ICS 67.050 QB CCS X04 中华人民共和国轻工行业标准 QB/T8036-2024 乳制品中乳糖的测定 核磁共振波谱法 Determinationof lactoseindairyproducts- Nuclearmagneticresonance spectroscopy 2024-03-29发布 2024-10-01实施 中华人民共和国工业和信息化部发布
QB/T8036-2024 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草.
本文件由中国轻工业联合会提出.
本文件由全国特殊食品标准化技术委员会（SAC/TC466）归口.
本文件起草单位：中轻技术创新中心有限公司、中国食品发酵工业研究院有限公司、中轻检验认证 有限公司、黑龙江飞鹤乳业有限公司、泉州市从心食品科技有限公司、中国科学院化学研究所、北京大 学、武汉中科牛津波谱技术有限公司、中国科学技术大学、方圆标志检验检测（山东）有限公司、信阳 师范大学、首都师范大学、天津科技大学、安徽国泰众信检测技术有限公司、北京市营养源研究限 公司、合肥德克斯低温技术有限公司.
本文件主要起草人：钟其顶、武竹英、樊双喜、刘英涛、向俊锋、张永章、扶晖、罗欢、张家海、 盛建伟、周秋菊、李中峰、陈楠楠、张祎远、陈洪周、吴一凡、王雨松、刘一诺、冯翠萍、崔洁、 刘永成、张秀、崔亚娟、董邦胜.
本文件为首次发布.
QB/T8036-2024 乳制品中乳糖的测定核磁共振波谱法 1范围 本文件描述了采用核磁共振波谱法测定乳制品中的乳糖含量.
本文件适用于液体乳、奶片、奶酪、乳粉中乳糖含量的测定.
2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款，其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件：不注日期的引用文件，其最新版本（包括的修改单）适用于本 文件.
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 JY/T0578超导脉冲傅里叶变换核磁共振波谱测试方法通则 JJF1448超导脉冲傅里叶变换核磁共振谱仪校准规范 3术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义.
4原理 于核磁共振信号强度（峰面积）互易原理，即给定线圈中核磁共振信号强度与90脉冲宽度成反比，分 别测定外标参考物质和待测样品的一维核磁共振氢谱（HNMR）及90脉冲宽度，外标法测定样品中乳 糖的含量.
5试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的二级水.
5.1试剂 5.1.1重水（D：O）：纯度≥99.8% 5.1.23-（三甲基硅烷基）代丙酸钠[（CHs):SiCD：CDCONa，TSP-d4].
5.1.3叠氮化钠（NaNg）.
5.1.4浓盐酸（HCI）.
5.1.5氢氧化钠（NaOH）.
5.2溶液配制 5.2.1TSP-da重水溶液（10g/L）：称取TSP-d4（5.1.2）0.5g（精确至0.1mg）和叠氮化钠（5.1.3） 5mg（精确至0.1mg），用重水（5.1.1）溶解后，转移至50mL容量瓶中，定容至刻度.
QB/T8036-2024 5.2.2盐酸（2mol/L）：量取浓盐酸（5.1.4）16.8mL，用水稀释并定容至100mL，临用现配.
5.2.3氢氧化钠溶液（2mol/L）：称取氢氧化钠（5.1.5）40g（精确至1mg），用水溶解后，转移至 500mL容量瓶中，定容至刻度，临用现配.
5.3标准品 5.3.1柠檬酸（CaHO，CAS号：77-92-9）纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品.
5.3.2乳糖（CuzHzzOu，CAS号：63-42-3）纯度≥98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准品.
5.4标准溶液配制 5.4.1柠檬酸外标溶液（2g/L）：准确称取柠檬酸（5.3.1）0.20g（精确至0.1mg），用水溶解后， 转移至100mL容量瓶中，定容至刻度.
于4C冰箱密封保存，有效期1个月.
5.4.2乳糖标准储备液（51.2g/L）：准确称取乳糖（5.3.2）5.12g（精确至1mg），用水溶解后，转 移至100mL容量瓶中，定容至刻度，临用现配.
5.4.3乳糖系列标准工作液：准确量取乳糖标准储备液（5.4.2）5mL于10mL容量瓶中，用水定容至 刻度，摇匀后得到25.6g/L的乳糖标准溶液.
使用以上相同方法，分别得到12.8g/L、6.4g/L、3.2g/L、 1.6g/L、0.8g/L、0.4g/L、0.2g/L、0.1g/L和0.05g/L乳糖标准工作液.
可根据样品中乳糖含量适当调 整乳糖标准工作液质量浓度范围及乳糖标准储备液质量浓度.
6仪器设备 6.1核磁共振波谱仪：氢（H）共振频率不低于400MHz：控温精度不低于土0.1K.
应按照JF1448 的规定对H谱灵敏度、H谱分辨力、H谱线型、H谱定量重复性进行校准.
6.2核磁共振样品管：外径5mm，同心且均匀：或由核磁共振波谱仪厂商提供、指定样品管.
6.3分析天平：感量为0.1mg和1mg. 6.4磁力搅拌器.
6.5pH计：分辨力为0.01.
6.6移液器：量程为10uL~100μL和100L~1000uL.
6.7滤膜：0.45um水相膜.
6.8离心机：转速≥8000r/min. 7分析步骤 7.1上机样品制备 7.1.1样品处理 称取液态样品10.0g或固态样品1.0g（精确至1mg）加入35mL水溶解，转移至50mL烧杯中，于磁 力搅拌器（6.4）上搅拌30min，用盐酸（5.2.2）或氢氧化钠溶液（5.2.3）调pH至4.4~4.5，转移至50mL 容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，取5mL定容后的溶液于10mL离心管中，以8000r/min离心10min， 取中间澄清溶液，使用0.45μm水相膜（6.7）过滤，取540uL滤液于核磁管中，加入TSP-d4重水溶液（5.2.1） 60μL，混匀，待测.
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QB/T 8036-2024 7.1.2标准样品配制 分别取900uL柠檬酸外标溶液（5.4.1）和乳糖系列标准工作液（5.4.3），分别加入TSP-d4重水溶液 （5.2.1）100L，涡旋振荡1min，各取600μL分别于核磁管中，待测.
7.2核磁共振分析参考条件 7.2.1样品管不旋转.
7.2.2检测温度：（300.0±0.1）K.
7.2.3空扫次数：4次.
7.2.4扫描次数：64次.
7.2.5谱宽：8000Hz.
7.2.6采样点数：65536.
7.2.7接收增益：16.
7.2.8跑豫延迟时间：≥4s.
7.2.9水峰压制脉冲序列：预饱和加相位循环.
7.3仪器校准 必要时，按照JY/T0578的规定对探头温度进行校准.
7.4核磁共振测定步骤 7.4.1将装有上机样品的样品管置于核磁共振波谱仪检测腔内，设置样品管不旅转.
7.4.2设置待测样品温度为300.0K，测样前应等待至少5min至仪器温度稳定.
7.4.3新建氢谐标准试验文件. 7.4.4锁场与调谐.
7.4.5匀场.
7.4.6测定样品的90°脉冲宽度，并记录结果.
7.4.7调用预饱和加相位循环的水峰压制脉冲序列.
7.4.8根据前述（7.2）要求设定空扫次数、扫描次数、谱宽、采样点数、接收增益、弛豫延迟时间， 设定90°脉冲宽度为前述测定值（7.4.6），根据水峰压制效果优化水峰压制位置、压制功率等，各样品 测试时保持接收机增益值一致，可根据样品质量浓度优化扫描次数.
7.4.9采集核磁共振水峰压制H谱信号.
7.4.10保存仪器所测谱图，并记录仪器状态和测量数据.
7.5校正因子（CF）的计算 将装有标准样品的核磁管置于核磁共振波谱仪检测腔内，根据前述（7.2）要求设定仪器条件，根 据前述（7.4）步骤进行测定.
测得样品和外标的定量峰积分面积和积分区域对应的氢原子数量，用计 算所得上机样品中乳糖的质量浓度为横坐标，乳糖系列标准工作液（5.4.3）质量浓度为纵坐标，绘制线 性回归方程y=ax，以线性回归方程的斜率a作为校正因子（CF）.
7.6样品的测定 将装有待测样品的核磁管置于核磁共振波谱仪检测腔内.
根据前述（7.2）要求设定仪器条件，根 据前述（7.4）步骤进行操作.
测得样品和外标的定量峰积分面积和积分区域对应的氢原子数量，根据 校正因子（CF）计算得到待测样品中乳糖的质量浓度，
